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目的:观察核黄素联合紫外光-A(Ultraviolet A,UVA)胶原交联后角膜基质透镜生物力学的变化,探索透镜最佳的紫外光光照时长。
方法:随机选取飞秒激光小切口角膜透镜取出术(Small Incision Lenticule Extraction,SMILE)中取得的角膜基质透镜,确保透镜完整、无损伤,共纳入150个透镜进行实验。将透镜随机分成3组,每组50枚,分别进行膨胀实验、抗水肿实验、抗酶解实验。每组再分为5个亚组,按照胶原交联过程中紫外光光照时长,分为未处理组(对照组)、15min组、20min组、25min组、30min组(n=10)。各组间术前屈光度和透镜厚度的差异无统计学意义(P>0.05)。参照标准角膜胶原交联(Corneal Collagen Crosslinking,CXL)的治疗过程,将符合纳入标准的角膜基质透镜完全浸泡于0.1%核黄素眼液中25min。当观察到透镜全层变成黄色时,将透镜暴露在UVA射线下(光照度3mW/cm2、波长370nm)。根据我们的分组,紫外光照射持续时间为15-30min不等,过程中持续使用紫外光光照度计检测光照度。照射完成后将角膜基质透镜保存于医用透明质酸钠中,置于4℃冰箱保存24h。24h后用吸水纸擦净透镜表面的透明质酸钠,然后分别进行膨胀实验、抗酶解实验、抗水肿实验来评价其特性。膨胀实验:使用自制的透明容器注满磷酸盐缓冲溶液(Phosphate Buffer Saline,PBS),将透镜用纤维蛋白胶固定其上,通过25G注射针与可调高度的盛满PBS溶液的软管连接,通过升降软管高度来模拟眼内压(Intra Ocular Pressure,IOP)的变化。使用Dino-Lite数字显微系统(AM4113T、An Mo有限公司、台湾)动态记录透镜在不同压力作用下的。抗水肿实验:使用电子天平称重透镜后,记录透镜的原始重量,将其置于PBS溶液内,在4℃冰箱里保存24h后称重,记录角膜基质透镜吸收水分前后重量变化,计算其膨胀率。抗酶解实验:将相同直径的透镜置于0.1%Ⅰ型胶原酶液中,在4℃冰箱里保存,每2h使用游标卡尺测量透镜直径的变化,直至透镜完全溶解或丧失基本形状。
结果:(1)与未处理组(对照组)比较,相同压力下交联20-25min的透镜弹性形变明显降低。但随着UVA持续时间增加到30min,透镜的弹性形变增加。对照组与15minCXL组眼压移位无明显差异。
(2)随着UVA时间的延长,透镜的抗水肿能力增强。
(3)与非交联组相比,CXL组抗胶原酶消化能力明显提高,25min CXL组胶原酶消化过程中残余直径最大。
结论:核黄素联合UVA胶原交联可改善角膜基质透镜的生物力学、抗水肿及抗酶解能力;这可能有助于角膜基质透镜在临床中的充分利用。
方法:随机选取飞秒激光小切口角膜透镜取出术(Small Incision Lenticule Extraction,SMILE)中取得的角膜基质透镜,确保透镜完整、无损伤,共纳入150个透镜进行实验。将透镜随机分成3组,每组50枚,分别进行膨胀实验、抗水肿实验、抗酶解实验。每组再分为5个亚组,按照胶原交联过程中紫外光光照时长,分为未处理组(对照组)、15min组、20min组、25min组、30min组(n=10)。各组间术前屈光度和透镜厚度的差异无统计学意义(P>0.05)。参照标准角膜胶原交联(Corneal Collagen Crosslinking,CXL)的治疗过程,将符合纳入标准的角膜基质透镜完全浸泡于0.1%核黄素眼液中25min。当观察到透镜全层变成黄色时,将透镜暴露在UVA射线下(光照度3mW/cm2、波长370nm)。根据我们的分组,紫外光照射持续时间为15-30min不等,过程中持续使用紫外光光照度计检测光照度。照射完成后将角膜基质透镜保存于医用透明质酸钠中,置于4℃冰箱保存24h。24h后用吸水纸擦净透镜表面的透明质酸钠,然后分别进行膨胀实验、抗酶解实验、抗水肿实验来评价其特性。膨胀实验:使用自制的透明容器注满磷酸盐缓冲溶液(Phosphate Buffer Saline,PBS),将透镜用纤维蛋白胶固定其上,通过25G注射针与可调高度的盛满PBS溶液的软管连接,通过升降软管高度来模拟眼内压(Intra Ocular Pressure,IOP)的变化。使用Dino-Lite数字显微系统(AM4113T、An Mo有限公司、台湾)动态记录透镜在不同压力作用下的。抗水肿实验:使用电子天平称重透镜后,记录透镜的原始重量,将其置于PBS溶液内,在4℃冰箱里保存24h后称重,记录角膜基质透镜吸收水分前后重量变化,计算其膨胀率。抗酶解实验:将相同直径的透镜置于0.1%Ⅰ型胶原酶液中,在4℃冰箱里保存,每2h使用游标卡尺测量透镜直径的变化,直至透镜完全溶解或丧失基本形状。
结果:(1)与未处理组(对照组)比较,相同压力下交联20-25min的透镜弹性形变明显降低。但随着UVA持续时间增加到30min,透镜的弹性形变增加。对照组与15minCXL组眼压移位无明显差异。
(2)随着UVA时间的延长,透镜的抗水肿能力增强。
(3)与非交联组相比,CXL组抗胶原酶消化能力明显提高,25min CXL组胶原酶消化过程中残余直径最大。
结论:核黄素联合UVA胶原交联可改善角膜基质透镜的生物力学、抗水肿及抗酶解能力;这可能有助于角膜基质透镜在临床中的充分利用。