【摘 要】
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目前关于抗HCMV基因工程抗体方面的研究资料甚少.美国Scripps研究所使用HIV-1型感染者的骨髓建立噬菌体抗体库,从中筛选出抗HCMV重组Fab抗体.日本Tokai大学医学院报道表明,从
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目前关于抗HCMV基因工程抗体方面的研究资料甚少.美国Scripps研究所使用HIV-1型感染者的骨髓建立噬菌体抗体库,从中筛选出抗HCMV重组Fab抗体.日本Tokai大学医学院报道表明,从HCMV噬菌体抗体库存筛选出6株Fab抗体,有1株具有明显的抗HCMV Town株活性.在此基础上我们进行了以下工作:首先,进行了抗HCMV Fab噬菌体抗体库的构建.采集具有高滴度HCMV抗体的感染者外周血,分离淋巴细胞,然后进行总RNA的提取以及cDNA的合成,用一系列特异性的PCR引物,通过PCR扩增特异性轻链基因和重链Fd段基因,在对PCR产物鉴定和纯化后,用轻链混合物与噬菌粒pComb3构建轻链库,随机挑选克隆进行轻链插入率鉴定,在确保轻链库的质量后,将重链混合物克隆入轻链库中,构建Fab噬菌体抗体库,随机挑选克隆进行重链插入率鉴定.最后使用辅助噬菌体对Fab噬菌体抗体库进行包装,检测库容量,结果表时所构建的Fab噬菌体抗体库的容量为2×10<6>,轻链插入率和重链插入率分别为100﹪和99﹪,足以满足筛库的需要.
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