【摘 要】
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草原龙胆（Eustoma Gradiflorum）属龙胆科一、二年生草本植物,原产于美洲中部地区,直到近20年草原龙胆才迅速发展起来。它具有色彩丰富,花朵美丽,花期长等特点,作为切花新秀,越
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草原龙胆（Eustoma Gradiflorum）属龙胆科一、二年生草本植物,原产于美洲中部地区,直到近20年草原龙胆才迅速发展起来。它具有色彩丰富,花朵美丽,花期长等特点,作为切花新秀,越来越受到人们的喜爱,世界年销售额1.1亿美元,列切花排名第七位。但草原龙胆种子细小,育苗困难,所以建立其快速繁殖体系使其充分满足市场的需要具有重要意义;同时由于常规育种的诸多弊端使得通过基因工程方法选育新品种成为必然的趋势。根据草原龙胆喜湿润不耐干旱的特点,本实验选择转入抗旱及抗盐碱基因,使其具有更强的抗逆性,对提高其逆境中的成活率有较大的意义。 本文以草原龙胆不同部位作为外植体,通过对基本培养基类型,激素种类及浓度,环境因素等方面的调控,对草原龙胆快速繁殖体系的建立做了较为细致的研究。同时本论文还利用β-葡萄糖甘酸酶（Gus）基因的瞬时表达和稳定表达的蓝斑数对农杆菌转化草原龙胆植株的愈伤组织的影响因素进行研究。比较分析后建立其较为适合的转化条件。通过用带有抗旱基因和抗盐碱基因的根癌农杆菌转化草原龙胆愈伤组织,并分化出植株。PCR检测初步证明抗旱基因已整合到草原龙胆植株中。试验中获得的研究成果主要有以下几个方面: 1、对灭菌效果进行比较发现:70%酒精浸泡30s后,用0.1%Hgcl2浸泡10分钟可达到最佳的灭菌效果,无污染率达到100%,死亡率为2%,根据部位的幼嫩程度可适当调整。 2、研究草原龙胆以茎段为外植体的丛生芽的诱导与增殖情况后发现,当基本培养基为MB（MS大量+B5微量+B5有机+Fe盐）,激素种类和浓度分别为:IBA2.0mg/L,6-BA0.5mg/L,GA2.0mg/L时,丛生芽的诱导率、分蘖率最高。 3、研究不同激素6-BA、KT、NAA、IBA不同浓度组合对草原龙胆愈伤组织发生的影响。比较法现:不同种类和浓度的激素组合大部分能使外植体脱分化,产生不同质地的愈伤组织,但当BA的浓度为1.0mg/L时,形成的愈伤组织有一半成水浸状,玻璃化较为严重,当其浓度减至0.5mg/L时现象消除。 4、研究不同培养基MS、N6和不同激素NAA、2,4-D组合对草原龙胆愈伤组织继代效果的影响。结果发现,不同处理愈伤组织褐化率都较低,可正常生长,当选用MS培养基,2,4-D浓度为0.5mg/L,NAA浓度为零时,愈伤组织为淡黄色,质地较松软,增重最快。 5、不同激素6-BA、NAA、KT组合对愈伤组织分化的影响结果表明:以MS为基本培养基,6-BA与KT单独以0.5mg/L浓度使用时,其分化出的苗正常、叶片浓绿、肥大,而当
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