【摘 要】
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果蝇是一种有着丰富遗传学表型的模式生物,经常被应用于基因功能的研究中。本实验室在1991年,从野外采集的黑腹果蝇自然种群中发现了一只黑色雌蝇,并由此建立了单雌系,其后代
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果蝇是一种有着丰富遗传学表型的模式生物,经常被应用于基因功能的研究中。本实验室在1991年,从野外采集的黑腹果蝇自然种群中发现了一只黑色雌蝇,并由此建立了单雌系,其后代连续14代互交,因为背甲的颜色特点,将此突变体命名为黑条体(blackstreak,,BSR)。在对黑条体的研究中发现了其与野生型比较缺失了一段40bp的DNA片段,且与功能未知基因CG3007重叠,将该基因命名为COX-R。
本实验室人员曾采用RT-PCR技术研究了CG31007基因在黑腹果蝇不同发育时期和不同组织部位的表达情况,发现其在幼虫中的表达量明显低于在蛹和成虫两个时期的表达量,而在头和身体的表达量相同。在此基础上利用生物信息学方法和多种亚细胞定位预测软件对基因CG31007编码的蛋白产物进行亚细胞定位预测分析,其定位于线粒体的可能性最大,因此该基因在色素形成中极有可能扮演重要角色。为了最终清楚果蝇中COX-R基因的功能,需要采用更精确的手段来验证。因此,本实验以果蝇突变体—黑条体的基因组DNA为模板,扩增包括COX-R基因在内的上下游同源臂序列,通过引入LoxP和Neo基因等步骤,以构条件性敲除COX-R基因的打靶载体。并经多个限制性核酸内切酶酶切鉴定和测序,证实我们构建的果蝇COX-R基因条件性打靶载体符合设计要求。该打靶载体的构建,为建立COX-R条件性基因敲除果蝇模型奠定基础。
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