【摘 要】
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本实验构建了四种新的解脂耶氏酵母表面展示系统,采用来自酿酒酵母的细胞壁蛋白FLO,Pir1和解脂耶氏酵母细胞壁蛋白Y1CWP1分别与来自枯草芽孢杆菌的甘露聚糖酶(man)融合展示在
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本实验构建了四种新的解脂耶氏酵母表面展示系统,采用来自酿酒酵母的细胞壁蛋白FLO,Pir1和解脂耶氏酵母细胞壁蛋白Y1CWP1分别与来自枯草芽孢杆菌的甘露聚糖酶(man)融合展示在细胞表面。其中细胞壁蛋白FLO的C端与外源蛋白的N端融合,而细胞壁蛋白Pirl和Y1CWP1均是N端与外源蛋白的C端融合;并且我们在融合蛋白的中间插入了HIS×6标签。构建的展示系统中有三种(解脂耶氏酵母polg/pINA1296FHM,polg/pINA1296MHP,polg/pINA1296MHY)为单拷贝展示,一种(解脂耶氏酵母polh/pINA1297MHY)为多拷贝展示。采用醋酸锂化学转化法转化,在MD营养缺陷性固体培养基上筛选重组子,并将所挑选的重组子分别通过PCR及间接免疫荧光实验来验证;同时我们还研究了这四种展示系统所展示的甘露聚糖酶的酶学性质,以魔芋粉作为底物,测得其反应的最佳pH值和温度分别是6.0和55℃,单拷贝展示重组菌在YPD液体培养基里,28℃,200rpm培养84h后细胞浓度达到最大值OD600等于47,而培养至84h时展示的甘露聚糖酶酶活开始上升,96h时达到最大酶活约63U/克细胞干重,多拷贝展示重组菌在YPD培养基里,28℃,200rpm培养96-108h细胞浓度达到最大值约OD60028,而培养至132h后展示的甘露聚糖酶酶活开始上升,144h时达到最大酶活约100U/克细胞干重。本文介绍的四种新的解脂耶氏酵母展示系统均为首次报道。
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