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目的:视网膜干细胞(RPC)是视网膜替代治疗的良好资源。本实验通过研究体外不同浓度血清(FBS)条件下,RPC的分化潜能以及TLX和微小RNA-9(miR-9)在控制RPC增殖分化方面的作用,以期为视网膜退行性疾病的干细胞疗法提供新的思路。 方法:⒈体外培养小鼠RPC,按血清浓度将其分为四组(1%,5%,10%和20%)诱导分化。倒置显微镜下记录细胞生长形态。定量聚合酶链反应(qPCR)和免疫细胞化学检测RPC分化相关的标记物表达。⒉转染miR-9前体/抑制剂,或者针对TLX的小干扰RNA,48小时后收集细胞。通过qPCR、免疫细胞化学和蛋白质免疫印迹分析视网膜发育相关的基因和蛋白表达。 结果:⒈1% FBS诱导 RPC更多分成视紫红质(rhodopsin)和蛋白激酶C-α(PKC-α)阳性的细胞。钙结合蛋白(calbindin)和激活蛋白2α(AP2α)表达水平在5%FBS诱导条件下更高。Brn3a表达在20%FBS条件下减少。20% FBS诱导产生更多胶质纤维酸性蛋白(GFAP)阳性的细胞。⒉过表达miR-9,抑制TLX在RPC的表达水平,增加神经元和胶质细胞的分化;而抑制miR-9的表达,TLX表达增加,并且促进RPC增殖。小干扰RNA抑制TLX表达后,能减弱RPC增殖,促进视网膜神经元和神经胶质分化。 结论:⒈低浓度血清有利于 RPC分化为视紫红质光感受器,有助于视功能的恢复。相反,高浓度的血清促进神经胶质细胞分化。⒉ miR-9和TLX形成反馈调节控制RPC增殖和分化。