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木瓜凝乳蛋白酶(Chymopapain简称CHP)是木瓜蛋白酶超家族的一种特殊蛋白酶,主要存在于未成熟的木瓜乳汁中.它可用于治疗腰椎间盘突出症、Rh血型的鉴定、肿瘤的辅助治疗、消炎、细胞分离以及啤酒的澄清和奶酪的制造等.木瓜凝乳蛋白酶的分离纯化很困难,作为蛋白酶对其性质缺乏深入细致的研究,对于其治疗腰椎间盘突出症的药理机制还存在争议.为了深入细致得了解木瓜凝乳蛋白酶的性质及其治疗腰椎间盘突出症的治疗机理、安全性,该论文研究了以酪蛋白和软骨蛋白多糖为底物的木瓜凝乳蛋白酶部分酶学性质及其体内外溶核作用.采用阳离子交换树脂Macro-Prep High S Support作介质、pH7.0的磷酸缓冲溶液作为洗脱介质,利用各蛋白酶的等电点不同进行离子交换层析,得到了木瓜凝乳蛋白酶的电泳纯产品.此分离方法易于操作,结果稳定,重现性好.以酪蛋白为水解底物,木瓜凝乳蛋白酶在pH为7.0时,其最适反应温度为80℃;在温度为37℃时,其最适pH为3~5.当pH为7.0时、反应温度为37℃时,木瓜凝乳蛋白酶的K<,m>值为1.25g/L,V<,max>为0.1g/(min·L).低浓度的NaCl、Ca<2+>和葡萄糖对木瓜凝乳蛋白酶都有激活作用,而盐酸胍对其有抑制作用.以软骨蛋白多糖为水解底物,木瓜凝乳蛋白酶在pH为7.0时,其最适反应温度为60℃;在温度为37℃时,最适pH为7.0.当pH为7.0、反应温度为37℃时,木瓜凝乳蛋白酶的K<,m>值为11.11g/L,V<,max>为0.03g/(min·L).一定浓度下的NaCl和Ca<2+>对木瓜凝乳蛋白酶均有激活作用.木瓜凝乳蛋白酶在体外能很好的水解人体髓核.在前4小时其水解髓核的速度较快,随后趋于稳定.木瓜凝乳蛋白酶在体内可以有效溶解髓核.当木瓜凝乳蛋白酶注射至大耳兔腰椎间盘内,X线学和组织学观察发现:1周后髓核结构破坏,椎间隙的高度减小不显著,4周后髓核被纤维软骨替代,椎间隙明显狭窄.但将其注入椎旁肌可造成组织坏死.因此为了临床使用的安全,应将木瓜凝乳蛋白酶准确注射至椎间盘内.该论文通过对木瓜凝乳蛋白酶的酶学性质及体内外溶核作用的研究,为进一步探讨其治疗腰椎间盘突出症的药理作用提供了依据.