【摘 要】
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本试验的主要目的是探索低温和获能对猪精子细胞骨架中两种主要成分微管蛋白和肌动蛋白含量的影响,从分子生物学角度探究猪精子低温冷冻保存后活率低下的原因,并利用鸽蛋中提
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本试验的主要目的是探索低温和获能对猪精子细胞骨架中两种主要成分微管蛋白和肌动蛋白含量的影响,从分子生物学角度探究猪精子低温冷冻保存后活率低下的原因,并利用鸽蛋中提取的低密度脂蛋白(LDL)代替传统的鸡卵黄作为冷冻保护剂,研究其对猪精子细胞骨架完整性的保护作用。本试验主要采用SDS-PAGE和Western Blot等试验方法对低温和获能等不同处理的精子蛋白质样品进行分析,得到以下结果：1.本试验采用CM获能液在恒温培养箱中以38℃,5%C02条件下孵育四小时。对其蛋白质样品进行蛋白质免疫印迹分析。结果表明猪精子获能后微管蛋白的含量几乎没有发生变化,而肌动蛋白的含量略有下降。2.对新鲜精子、获能精子、低温处理精子的蛋白进行SDS-PAGE,试验结果显示,低温保存后猪精子蛋白的种类和一些蛋白质的含量发生了变化,而获能后精子样本与鲜精样本基本没有差异。3.将猪精子在不同温度(-80℃和-196℃)下进行冷冻24小时后对其蛋白质样本进行SDS-PAGE和Western Blot分析。试验结果表明：冻融后猪精子微管蛋白略有下降,而肌动蛋白的下降量十分显著；-196℃的冷冻效果略好于-80℃。4.用鸽蛋中提取的LDL代替传统的鸡卵黄作为冷冻保护剂,不同温度(-80℃和-196℃)下进行冷冻保存。将冻融后的精子样本进行Western Blot分析。结果表明：无论是-80℃还是-196℃,添加LDL后微管蛋白和肌动蛋白的含量均更接近鲜精样本,且两组间明显差异。5.对四组不同冷冻处理后猪精子冻融后生物学性状进行检测,结果表明：添加LDL组的精子活率、顶体完整率和质膜完整率均高于鸡卵黄组。
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