【摘 要】
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‘红暗柳’甜橙(Citrus sinensis[L.]Osbeck)是一个特异性积累番茄红素的普通甜橙红肉突变体。‘红暗柳’与‘暗柳’的比较蛋白组学研究发现一个脂类相关质体蛋白(PAP)的表达
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‘红暗柳’甜橙(Citrus sinensis[L.]Osbeck)是一个特异性积累番茄红素的普通甜橙红肉突变体。‘红暗柳’与‘暗柳’的比较蛋白组学研究发现一个脂类相关质体蛋白(PAP)的表达伴随果实发育与色素累积显著上升,且在‘红暗柳’中的累积量高出暗柳两倍以上。质体相关蛋白是一大类古老而保守的蛋白质家族,参与脂蛋白结构如质体球蛋白和原纤维的合成,与质体分化和类胡萝卜素形成和储存密切相关。本研究旨在分离编码该蛋白的基因CSPAP并通过遗传转化的方法对其功能验证作初步的探索。主要工作和结果如下：1、在‘红暗柳’中克隆到CsRAP的cDNA全长为972 bp的片段,与已报道编码PAP蛋白的基因有很高的同源性；构建了CsPAP基因原核表达载体并在大肠杆菌中诱导了预测大小约为29 kD的特异蛋白的表达。2、构建了CsPAP基因的植物组成型表达载体,并以农杆菌介导的方法对国庆1号(Citrus unshiu)愈伤组织、山金柑(Fortunella hindsii)上胚轴以及番茄(Lycopersicon esculentum)子叶进行了遗传转化。通过筛选培养获得了国庆1号的抗性愈伤组织和番茄的再生抗性苗,经PCR检测为转基因阳性。3、Real-time PCR检测到一个抗性愈伤系中CsPAP的表达量比未转基因对照高出50倍以上。另外,ABA处理和逆境处理(NaCl.H202和脱水处理)能影响伏令夏橙愈伤组织中CsPAP基因的表达。
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