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小反刍兽疫病毒（Peste des Petits Ruminants Virus，PPRV）是一种主要感染山羊、绵羊、美国白尾鹿等小反刍动物的一种病毒，主要于非洲西部、中部和亚洲的部分地区流行。在严重暴发时，死亡率为100％，在轻度发生时，死亡率不超过50%。它的重爆发也危机我国多个省份的畜牧业发展。该疾病尚无有效的治疗方法，防控的主要措施是通过疫苗免疫。随着转基因技术的发展，利用转基因技术生产植物疫苗受到了广泛的关注。F蛋白是组成病毒囊膜表面的一种纤突，是决定病毒感染成败的关键因素之一。它在病毒诱导细胞病理学方面发挥主要作用，能够诱导产生细胞溶血素、细胞融合以及启动病毒感染细胞的生物学活性。 紫花苜蓿（Medicago sativaL）是为欧亚大陆及世界各国广泛种植的一种优良饲料牧草，产量高，适口性强，营养丰富，再生性强，利用年限长。所以本实验以紫花苜蓿进行转基因技术研究。 本实验将构建好的含有F基因的表达载体检测并转化至农杆菌EHA105中，筛选阳性菌落，验证保存。用于接下来的农杆菌介导转化体系中。 本实验以赛特品种的子叶和下胚轴为外植体，通过诱导愈伤组织的形成，分化，建立高频的再生体系。研究不同培养基类型，不同浓度的激素对紫花苜蓿再生体系的影响。利用农杆菌介导法将已构建好的含有小反刍兽疫F基因的表达载体转化到紫花苜蓿中，研究了最佳侵染浓度和时间，最适Cef浓度和最适Kan浓度，以及共培养时间的研究，从而建立紫花苜蓿农杆菌介导遗传转化的体系。 主要结果如下： (1)验证构建好的含有F基因的表达载体依然存在于保存的大肠杆菌DH5α中。转化构建好的含有F基因的表达载体到农杆菌EHA105中，并验证转化成功，保存菌液。 (2)赛特苜蓿最佳再生体系为：以MS为基础培养基，愈伤诱导最适2,4-D浓度为2mg/L，最佳KT浓度为0.25mg/L。愈伤分化最适NAA和KT的比例为，0.1mg/L NAA和0.5mg/L KT。 (3)确定了最适合的抑菌Cef浓度为500mg/L，最适合的筛选培养基Kan浓度为50mg/L。 (4)农杆菌介导转化时最佳侵染浓度为OD600=0.5，最佳侵染时见为10min，最佳共培养时间为3d。 (5)愈伤诱导培养基：MS+2mg/L2,4-D+0.25mg/L KT+500mg/L Cef+50mg/L Kan。最佳分化培养基:MS+0.1mg/L NAA+0.5mg/L KT+300mg/L Cef+50mg/L Kan (6)农杆菌介导转化体系为：将预培养3d的外植体（子叶和下胚轴），放于OD600=0.5的农杆菌菌液中，侵染10min。共培养3d后，进行脱菌处理，后转移至MS+2mg/L2,4-D+0.25mg/L KT+500mg/L Cef上培养7d。脱菌结束后转移至含50mg/L Kan和300mg/L Cef的愈伤诱导培养基上进行诱导分化培养。每15d继代一次。 (7)获得抗性再生苗。