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背景和目的人呼吸道合胞病毒(RSV)是婴幼儿呼吸道感染的主要病原体,先天性心脏病患者、免疫缺陷个体和老年人也是易感人群,主要引起毛细支气管炎和肺炎。呼吸道合胞病毒属副粘病毒科肺病毒属,由宿主细胞膜包裹病毒核衣壳形成球形病毒颗粒,病毒基因组为不分节段单股负链RNA,包含10个基因编码11种病毒蛋白。G糖蛋白能促进病毒对宿主细胞的吸附作用,F糖蛋白可促使病毒与宿主细胞以及宿主细胞之间的融合,是重要的保护性抗原。呼吸道合胞病毒在人群中的感染较为普遍,呈冬季季节性流行的特点。2周岁以内的婴幼儿几乎都经历过呼吸道合胞病毒感染,而且二次感染比例可达50%。在全世界范围内,每年有5‰婴幼儿由于呼吸道合胞病毒感染需住院治疗。最近的研究显示呼吸道合胞病毒在人群中的感染率和死亡率较高,造成的危害远远超过流感。接种疫苗是预防和控制传染病最有效的措施,但无法彻底解决疫苗增强疾病的难题使安全有效的呼吸道合胞病毒疫苗的研制受阻。目前仍无特异性防治方法。Chanock发现人呼吸道合胞病毒后,FI-RSV疫苗试验于十九世纪六十年代首次在婴幼儿中进行,但80%受试者自然感染RSV后出现包括肺炎,支气管炎,肺炎等较严重的呼吸道疾病,并有两名受试儿童死亡。尸检显示为伴有肺气肿和气胸的支气管肺炎。组织学检查发现肺组织广泛的炎细胞浸润和嗜酸性粒细胞增多,提示免疫病理损害可能是呼吸道合胞病毒疫苗增强疾病的主要原因。此类因疫苗免疫接种使相应病原微生物感染时致病作用增强的疾病或现象,被称之为“疫苗增强疾病”(Vaccine Enhanced Disease, VED)。疫苗增强疾病的存在给相关疾病的预防和控制带来了极大的困难。大量研究显示细胞因子在呼吸道合胞病毒疫苗增强疾病起着较重要的作用。经FI-RSV免疫的BALB/c的小鼠在感染呼吸道合胞病毒后出现强烈的Th2细胞反应,Th2相关细胞因子IL-4和IL-13分别能够促进肺嗜酸性粒细胞增多。在表达G蛋白的痘病毒重组疫苗(vacvG)免疫小鼠中,IL-13是肺嗜酸细胞增多过程所必须的,同时在趋化因子CCL11, CCL17和CCL22的作用下,Th2细胞和嗜酸性粒细胞进入肺组织。Th1细胞因子IFN-γ能抑制Th2细胞反应和肺嗜酸细胞增多症,但同时也加重了体重减轻和临床症状等系统疾病。TNF-a既能通过促进Th1细胞因子IFN-γ表达,也可单独在疫苗增强疾病过程中发挥作用。这些研究显示细胞因子和呼吸道合胞病毒疫苗增强疾病紧密相关。探索呼吸道合胞病毒疫苗免疫各阶段细胞因子的变化能为安全有效疫苗的研究提供新的角度。方法制备呼吸道合胞病毒A型FI-RSV疫苗；建立FI-RSV疫苗增强疾病BABL/c小鼠模型；逐日观察各组小鼠感染呼吸道合胞病毒后的体重和临床症状；苏木精伊红(HE)染色检查肺组织病理学变化,观察支气管周围炎、气管炎、肺泡炎和间质性肺炎；用小鼠细胞因子抗体芯片检测检测支气管肺泡灌洗液(BALF)细胞因子表达；免疫组织化学染色检查单核细胞趋化因子(MCP-1)在肺组织的分布特征。结果FI-RSV免疫组小鼠感染呼吸道合胞病毒后体重减轻和临床症状加重。组织病理学分析显示FI-RSV免疫组小鼠感染呼吸道合胞病毒后出现更为广泛肺组织炎性病变和肺嗜酸细胞增多症,说明FI-RSV疫苗增强疾病模型成功建立。细胞因子抗体芯片检测的结果证实FI-RSV疫苗可以改变肺组织细胞因子环境,促进单核细胞趋化因子(MCP-1)的表达和分泌。应用免疫组织化学染色显示正常肺组织上皮细胞内能表达少量MCP-1,有淡黄色颗粒。FI-RSV免疫组小鼠肺组织上皮细胞染色加深,呈棕黄或棕褐色,再次证实FI-RSV疫苗免疫都能促进MCP-1的过量表达和分泌。结论本研究成功建立BALB/c小鼠FI-RSV疫苗增强疾病模型；肺组织上皮能表达少量的MCP-1可能有助于维持机体正常的免疫功能；FI-RSV疫苗能促进MCP-1表达和分泌,为深入研究疫苗增强疾病提供了线索和依据。目的构建编码呼吸道合胞病毒G蛋白基因的重组质粒pcDNA3.1/G,为深入探索RSV疫苗增强疾病奠定基础。方法利用基因重组的方法构建含RSVG蛋白基因的重组质粒,酶切和测序鉴定,Western blot检测目的基因在Hek293T细胞的表达以及目的蛋白的抗原性。结果成功构建了编码RSVG蛋白基因的重组质粒pcDNA3.1/G, Western blot证实目的蛋白在体外具有较好的抗原性。结论我们成功构建的pcDNA3.1/G能在真核细胞中表达并具有较好的抗原性。