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目的:在以往工作的基础上,进一步研究不同中医治法调整肝癌基因表达的作用.具体包括:1)分别建立正常大鼠肝脏和DEN诱导大鼠肝癌的cDNA文库,以供基因全序列筛选之用;2)分别建立和采用经典的cDNA文库筛选方法和RACE PCR两种方法,筛选以往发现的不同治法独特下调的若干新基因片段的全部序列;3)分析包括清热解毒、活血化瘀、健脾理气等临床常用治疗肝癌不同治法所下调的基因范围和这些基因的功能.结论:1)移植和建立了cDNA文库的构建方法.2)分别构建了大鼠肝脏和DEN诱导大鼠肝癌的cDNA文库,而且达到了较高的质量.3)摸索、建立和优化了cDNA全部序列筛选的两种常用技术:经典的筛选方法以及RACE PCR筛选方法.4)经典筛选方法最终没有得到阳性克隆,推测主要是这些基因在cDNA文库中的拷贝数太低.扩大第一轮筛选的范围,可望筛选到这些基因的全部序列,而且该方法具有稳定、可靠、后续工作简单等优势.5)RACE PCR筛选得到了一个新基因DD31的cDNA全长序列,并进行了初步的分析,结果发现在肝和肝癌组织中最高表达的,对其的蛋白结构分析发现编码的蛋白质是新的蛋白,与中医证和肝癌的关系是进一步研究的方向.另两个基因没有得到PCR产物,推测主要与引物设计等因素有关,也符合导师以往发现的RACE PCR筛选成功率低的现象.但对于那些低拷贝数的基因,以及大量的基因筛选,RACE PCR又有着明显的优势.6)基因芯片的结果进一步证明各个中医治法独特下调的,涉及的基因功能分类是不同的,是多靶点、多途径的.而且显著下调的已知基因主要集中在信号转导和细胞周期类.对国外这些基因的有关报道检索,与肿瘤有关的且经过治法干预后独特下调的已知基因进行分析发现,这些治法的作用靶点是不同的,从分子水平证实了中医"辨证论治"对应复杂病机的特点;但这些基因之间又不是独立的,从而进一步从后基因组学的角度说明了中医的"整体观念的特点.同时,该课题中我们涉及的基因还只是初步的分析,大量的工作需要继续深入研究.7)采用基因芯片揭示出大量的基因表达变化,其中功能至今未知的EST序列占到了70﹪,这些基因中有些无论从读数的相对比值还是绝对读数上都是较高的,这样的结果给我们今后的研究带来很大的空间,今后我们将重点关注一些显著变化的基因,希望有助于深化中医基础学科对肝癌的认识,并筛选出不同治法防治肝癌的分子作用靶点.