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乙型病毒性肝炎是由乙肝病毒(hepatitis B virus,HBV)导致的严重危害人类健康的重大传染性疾病。据统计中国乙肝病毒携带者超过1.2亿人,约占全世界3.5亿乙肝病毒携带者的1/3。现有预防和治疗乙型病毒性肝炎的药物主要有乙肝疫苗、干扰素、核苷类似物等,但是这些药物存在一定不足,远不能满足临床需要。
为了从中药中发现抗HBV的活性成分,我们选择了龙胆科(Gentianaceae)獐牙菜属(Swertia)植物毛萼獐牙菜(Swertia hispidicalyx)进行了较系统的化学成分研究,使用各种分离技术(硅胶、RP-8、RP-18以及Sephadex LH-20等),从毛萼獐牙菜的乙醇提取物中分离得到30个化合物,其结构类型涉及裂环烯醚萜及其苷、口山酮及其苷、三萜、甾体、木脂素、长链脂肪类等。通过波谱学分析[UV、IR、MS、1H NMR、13C NMR(DEPT)、HSQC、HMBC、COSY、ROESY],其结构分别鉴定为:毛萼獐牙菜内酯A-E(swerhispilactones A-E,1-5)、蒲公英赛-14-烯-3α,6β-二醇(taraxer-14-ene-3α,6β-diol,6)、龙胆内酯(gentiolactone,7)、獐牙菜苦苷(swertiamarin,8)、2’-间羟基苯甲酰獐牙菜苷(deacetylcentapicrin,9)、1,3,5,8-四羟基口山酮(1,3,5,8-tetrahydroxyxanthone,10)、1,5,8-三羟基-3-甲氧基口山酮(1,5,8-trihydroxy-3-methoxyxanthone,11)、1-羟基-2,3,5-三甲氧基口山酮(1-hydroxy-2,3,5-trimethoxyxanthone,12)、norswertianolin(13)、swertianolin(14)、1,3,5,8-tetrahydroxy-7-(1,3,5,8-tetrahydroxy-2-xanthonyl) xanthone(15)、3-表-蒲公英赛醇(3-epitaraxerol,16)、木油树酸(aleuritolic acid,17)、蒲公英赛-14-烯-2β,3β-二醇(taraxer-14-ene-2β,3β-diol,18)、山楂酸(maslinic acid,19)、木栓酮(friedelin,20)、β-sitosteryl-3-O-β-D-glucopyranoside-2-0-palmitate(21)、3,4-dihydro-1H,6H,8H-naphtho[1,2-c:4,5-c’,d] dipyrano-1,8-dione(22)、(+)-丁香脂索[(+)-syringaresinol,23]、松柏醛(trans-coniferyl aldehyde,24)、芥子醛(sinapaldehyde,25)、正三十八烷醇(1-octatriacontanol,26)、8,16-二羟基十六烷酸(8,16-dihydroxyhexadecanoic,27)、齐墩果酸(oleanolic acid,28)、β-谷甾醇(β-sitosterol,29)和胡萝卜苷(daucosterol,30)。化合物1-6为新化合物,其余化合物均为首次从毛萼獐牙菜中分离得到,特别是毛萼獐牙菜内酯A(1)为口山酮和裂环烯醚萜苷元通过碳碳键连接的聚合体,这是我们首次发现和报道。
我们采用Hep G2.2.15细胞模型对所得量较大化合物进行了抗HBV活性研究,发现8个化合物对HBV HBsAg,HBeAg和HBV DNA有一定的抑制作用,化合物10、11和18的活性最好。化合物10对HBV HBsAg、HBeAg和HBV DNA的IC50分别为0.82、0.03和0.07 mM,SI均大于1.16、28.32和14.37;化合物11对HBV HBeAg和HBV DNA的IC50分别为0.35和0.09 mM,SI均大于2.8和10.89;化合物18对HBV HBsAg和HBeAg的IC50分别为0.28和0.29 mM,SI分别大于6.92和6.60。该研究较系统的分离鉴定了毛萼獐牙菜的化学成分,首次揭示了其部分抗HBV活性成分,为深入研究毛萼獐牙菜提供了初步的化学和药理学基础。
本论文综述部分对獐牙菜属植物的粗提物和单体成分在保肝利胆、抗氧化、降血糖、抗病毒、抗菌和抗疟等药理活性进行了文献综述。