一种哺乳动物性腺特异表达基因的克隆及组织细胞定位的初步研究

• 作 者: 秦文松
• 机 构: 广西大学
• 出 处: 广西大学
• 发表日期: 2008年期
• 关键词: 哺乳动物 性腺特异表达基因 基因克隆 组织细胞定位 基因表达

本论文旨在研究一种哺乳动物性腺特异表达基因—GSE(Gonad-Specific Expression Gene，GSE)和其在睾丸组织中的定位。论文共分为两部分：第一部分为文献综述部分；第二部分包括第二章和第三章，为试验研究部分。
第二章的研究目的是通过对广西本地水牛GSE基因及3端序列进行克隆和分析，为进一步研究水牛GSE基因的功能打下基础。根据小鼠GSE基因以及GeneBank中与小鼠GSE基因相似的其它哺乳动物的相似基因进行分析，设计一对扩增水牛GSE基因保守区序列的引物。然后以成年水牛睾丸总RNA为模板，通过RT-PCR的方法扩增出长度为396 bp的水牛GSE基因保守区序列。扩增产物经纯化后，连接至pMD18-T载体上进行测序。结果显示，该片段与小鼠GSE基因的覆盖区同源性为76％。再根据所得到的这段已知序列设计一条上游引物，通过3RACE的方法扩增水牛GSE基因的3’端序列，结果得到42-bp的3’非编码区。将该片段与先前扩增得到的序列拼接后得到了一段长度为700 bp的片段，这也是目前得到的水牛GSE基因的最长片段。应用Scansite蛋白质磷酸化预测软件对得到的水牛GSE蛋白进行分析发现，水牛GSE基因所编码的多肽链中含有一个具有SH2结构域的Shc蛋白的结构(VKLSPGQYELLPPPV)，同时还含有一个蛋SH2结构域的Shc蛋白的结构(VKLSPGQYELLPPPV)，同时还含有一个蛋白激酶C的μ亚型(PKC-μ)结构(PPPVPKQASRSFVFRSTVQRFP)。这些结构说明，GSE蛋白很可能在磷酸化和去磷酸化方面具有生物活性。
第三章的研究目的是通过组织原位杂交的方法，确定水牛GSE基因在睾丸中确切的表达部位，从而进一步了解该基因在配子发生中的作用。用扩增得到的水牛GSE基因序列作为模板，制备用于组织原位杂交的地高辛标记的cDNA探针，并经过效率检测和斑点杂交检测后确定可用于组织原位杂交。最后，将制备好cDNA探针与成年水牛睾丸石蜡切片进行组织原位杂交，结果发现，在成年水牛睾丸曲细精管的基底室出现了杂交信号，近腔端和曲细精管的管腔中几乎无杂交信号。通过与睾丸曲细精管上皮的细胞组成相结合进行分析发现，水牛GSE基因应该是在初级精母细胞中大量表达的。由于初级精母细胞正处于减数分裂时期，在这些细胞中有GSE基因的表达，说明该基因很可能与减数分裂有关。