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在兽医临床中,奶牛乳房炎是规模化奶牛养殖场中最常见的疾病。牛源性链球菌是引发该病的主要病原菌之一。目前,国内外针对奶牛乳房炎还没有较为理想的免疫疫苗,仍主要以抗菌类药物进行防治。然而,由于近些年抗菌药物的广泛应用乃至于乱用,导致细菌耐药性的普遍升高,并呈现出高程度、多重耐药的发展趋势,对人和动物健康及公共卫生安全造成潜在威胁。本实验收集2016-2017年我国部分地区规模化奶牛养殖场乳样63份,经分离培养、应用链球菌超氧化物歧化酶(sodA基因)进行PCR扩增以获得乳房链球菌35株,总体分离率达到55.56%。对临床分离菌株的7种常见毒力基因进行PCR检测,结果显示,scpB基因检出率最高为68.57%,其次为cfb(57.14%)、cyl(48.57%)、glnA(31.43%)、hylB(22.86%)、lmb(8.57%),bac基因未检测到。采用Kirby-Bauer(K-B)药敏纸片扩散法检测35株乳房链球菌对30种抗菌药物的敏感性和耐药性,并且检测10种常见耐药基因的携带情况。结果显示,临床分离菌株对磺胺甲恶唑表现为高度耐药,耐药率高达85.72%;而对土霉素、多西环素、四环素表现相对敏感,耐药率为31.43%、22.86%和20%。耐药基因的检测结果显示,氨基糖苷类aacC2(57.14%)、aacC4(42.86%)的检出率最高;β-内酰胺类blaTEM(48.57%)和blaCTX-M(31.43%)及喹诺酮类GyrA(37.14%)和ParC(37.14%)检出率大体相似;大环内酯类ermB(20.00%)和mefA(17.14%)相对较低,氨基糖苷类的AphA3和大环内酯类的ermA均未检测到。采用微量肉汤稀释法和棋盘法测定阿米卡星(AK)、头孢噻呋(EFT)、红霉素(E)以及马波沙星(MBF)单用及联用后对乳房链球菌的最小抑菌浓度(MIC),计算部分抑菌浓度指数(FIC),判断药物联用后的相互作用;采用琼脂二倍稀释法测定药物单用及联用后对乳房链球菌的的防突变浓度(MPC),计算选择指数SI(MPC/MIC),判定能否缩小耐药突变选择窗(MSW),筛选出最佳联合用药方案。结果表明:单用时,AK、EFT、E、MBF的MIC单范围分别为8-64、0.5-8、0.125-16、1-16μg/mL;联用后,AK与EFT、E、MBF的FIC指数分别为0.625-1、0.3125-0.75、0.3125-0.75,说明AK分别与其他三种药物联用后,对乳房链球菌病均具有协同或相加作用。药物单独应用时,AK、EFT、E、MBF的MPC联分为128-512、64-512、16-256、64-512μg/mL;AK与EFT、E、MBF联合应用后,SI分别缩小了1-2、1-2、2-4倍,说明AK分别与其他三种药物联用后均可以缩小MSW,且AK与MBF联用后作用较为明显。本实验通过对我国部分地区规模化奶牛养殖场乳房链球菌毒力基因和耐药现状的分析,为研制以其链球菌毒力基因为抗原的新型疫苗提供理论依据,并且通过探讨体外临床上相对敏感的抗菌药物联用对其耐药突变选择窗的影响,为缓解其耐药现状、减少乳房链球菌耐药突变菌株的产生提供了实验数据,对防治、指导临床合理用药以及新药研发具有较大的积极指导意义。