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新城疫(Newcastle disease，ND)是由新城疫病毒(NDV)引起的一种主要侵害鸡、火鸡、野禽等禽类的高度接触性、致死性传染病，多呈败血经过，主要特征表现为下痢、呼吸困难、浆膜及黏膜出血，是危害世界养禽业的重要传染病之一。虽然目前我国采取了多种防治措施来控制ND的大规模流行，但是随着NDV新基因（亚）型的出现、宿主范围扩大和毒力增强等因素，使得ND的防控更加复杂化。因此，加强NDV分子流行病学的监控，研究代表性流行毒株的致病性对明确NDV毒株的流行趋势具有重要意义。本研究包括三部分: 1.新城疫流行毒株F和HN基因克隆和序列分析 从山东省等地养禽场疑似ND的病料中分离鉴定出11株NDV，对其F和HN基因进行全长克隆序列测定分析。结果表明，所有NDV分离株F基因长度为1662nt，编码553个氨基酸，核苷酸和氨基酸序列同源性分别为95.4％～99.8％和89.7％～99.8％; HN基因长度为1716nt，编码571个氨基酸，核苷酸和氨基酸序列同源性分别为96.7％～99.9％及96.3％～99.7％。其F蛋白前体F0裂解位点附近的氨基酸序列均为112RRQKRF117，符合NDV强毒株的特征。将11株NDV分离株与GenBank中31株参考毒株F基因核苷酸序列绘制系统发育进化树。分析发现几株分离株均属于基因Ⅶd亚型，表明基因Ⅶ型NDV是目前山东省的优势基因型。 2.新城疫不同宿主毒株致病性研究 为阐明不同基因亚型或不同宿主来源NDV对禽类的致病性差异，本文研究设计了两个动物回归实验。第一个动物实验选取两株鸭源基因Ⅶ型NDV，以0.2和0.5 mL剂量分别通过滴鼻或肌肉注射对商品鸭进行人工感染试验，同时用0.1 mL剂量通过滴鼻感染SPF鸡。结果发现SPF鸡攻毒后于3天～6天100％发病死亡，而实验鸭未见明显发病死亡但有排毒。第二个动物实验选取了一株ND鸽源基因Ⅵ型和一株基因Ⅶ型流行毒株对鸽子进行人工感染实验。结果显示基因Ⅵ型毒株对鸽有高度致病性，鸽感染后表现瘫痪、翅膀下垂或斜颈等神经症状和排绿色稀粪，而对SPF鸡无明显的临床症状不表现致病性;Ⅶ型流行毒株对鸽子致病性不强有排毒表现。不同禽源分离株的致病性试验结果表明，各种禽源NDV对不同宿主致病性存在差异。 3.胶体金免疫层析试纸条的研制 采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金，用纯化的单抗C3B3标记，制备金标抗体玻璃纤维素膜;将纯化的单抗1E1固定于硝酸纤维素膜(NC)上作为捕获抗体组装成NDV免疫胶体金检测试纸条。使用此试纸条可以特异性地检NDV，最低能够检测出2个血凝单位的病毒量，于1-5 min内可肉眼观察检测结果，特异性较强，在临床上便于NDV的快速诊断以及检测样品的迅速筛查。