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一、金银花与灰毡毛忍冬指纹图谱比较 目的：建立金银花和灰毡毛忍冬两种药材的高效液相色谱指纹图谱，得到对照图谱，通过指纹图谱的整体特征，对金银花和灰毡毛忍冬两种药材进行比较。 方法：对比不同提取溶剂、不同提取方法所获得的HPLC指纹图谱，选择图谱显示化学成分较多，提取率较高的方法作为提取条件。本文选用合适的色谱柱及检测波长，优选流动相的组成、配比、流速，调节柱温，使色谱条件符合指纹图谱的要求。在已确定的提取条件和色谱条件下，分别建立金银花和灰毡毛忍冬两种药材的指纹图谱，并进行方法学考察。选择不同产地的两种药材各11批，制备供试品溶液，进行指纹图谱分析，得到对照图谱。使用“计算机辅助相似度评价软件”进行数据处理，分别对两种药材进行相似度比较分析。根据对照图谱的整体特征，有效比较两种药材。 结果：样品提取方法，50％乙醇溶液超声30min，其所得图谱峰信息较多，保留时间有较好的稳定性与重复性。色谱条件以Hypersil gold C18柱(5μm,4.6mm×250mm),乙腈-0.05%磷酸溶液为流动相进行梯度洗脱；流速为0.5ml/min,柱温30℃;检测波长为240nm,进样量5μl。在上述色谱条件下，绿原酸的保留时间约为23分钟，基本与其它色谱峰分开。进行方法学考察，分析方法可靠。分别得到金银花和灰毡毛忍冬药材的指纹图谱，并生成对照图谱。11批金银花药材指纹图谱相似度较好，各批药材间的相似度均在0.890以上，11批灰毡毛忍冬相似度较好，各批药材间的相似度均在0.9以上，各批药材与对照指纹图谱间的相似度均在0.9以上，反映了药材同源性及种内药材品质稳定。利用保留时间和紫外光谱同时对金银花和灰毡毛忍冬药材的色谱峰进行识别，有6个共有峰，分别为14、23、25、43、60、68分钟时的色谱峰，金银花和灰毡毛忍冬对照图谱的比较，6个共有峰占金银花对照图谱总峰面积的67.2%,占灰毡毛忍冬对照图谱总峰面积的93.9%，说明金银花和灰毡毛忍冬药材HPLC指纹图谱整体形状非常相似。但金银花与灰毡毛忍冬药材的对照图谱也存在明显的不同，其信号主要分为三个区段：第Ⅰ区包括数个小峰(tR在7-18min);第Ⅱ区 tR在27min左右金银花有一明显特征峰，而灰毡毛忍冬没有检测到该色谱峰。第Ⅲ区有6个小峰，其中包括木犀草苷对应的色谱峰，灰毡毛忍冬药材在相同的分离条件和进样量的情况下，检测不到明显的色谱峰（tR在47-58min）。第Ⅱ、Ⅲ区信号构成了区分金银花与灰毡毛忍冬的突出特点。同时，峰面积体现了特征成分的量的信息，灰毡毛忍冬各成分的峰面积均比较大，特别是绿原酸的峰面积，约是金银花峰面积的2倍。 结论：本文建立了金银花和灰毡毛忍冬两种药材的HPLC指纹图谱，并得到对照指纹图谱，其检测方法精密度和重复性良好，可用于金银花和灰毡毛忍冬两种药材的比较与鉴别。 二、金银花和灰毡毛忍冬有效成分含量测定 目的：建立测定绿原酸和木犀草苷含量的方法，测定不同产地金银花药材中绿原酸和木犀草苷的含量；并用此法测定不同产地灰毡毛忍冬药材中绿原酸的含量，进行含量比较。 方法：采用高效液相色谱法测定绿原酸和木犀草苷，Hypersil gold C18柱，流动相乙腈-0.05%磷酸溶液梯度洗脱，流速为0.5ml/min,检测波长设臵为327nm/350nm转换波长，柱温25℃。 结果：11批金银花药材中绿原酸的含量20.00mg/g-34.89mg/g，平均含量29.20mg/g，木犀草苷的含量0.4995mg/g-0.9098mg/g，平均含量0.6815mg/g。11批灰毡毛忍冬药材中绿原酸的含量47.32mg/g-74.48mg/g，平均含量在57.90mg/g。 结论：所建立的高效液相含量测定方法灵敏度高，专属性强，重复性好，能准确、快速地进行含量测定。灰毡毛忍冬药材中绿原酸的含量大于金银花中的绿原酸的含量；金银花含有的木犀草苷0.4995mg/g-0.9098mg/g，灰毡毛忍冬中没有检测到该成分。