泽泻药效物质基础及其利尿作用研究

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本研究以福建省道地药材泽泻为研究对象,采用硅胶层析、中压制备液相、质谱引导的高压制备液相等技术手段对泽泻化学成分进行了系统分析,采用液质联用和一测多评技术进行泽泻的质量控制研究,运用均匀设计法对其利尿作用活性成分组合进行优化研究。主要开展了以下研究内容:  1.采用轴向压缩层析柱结合-MPLC、pHPLC、质谱引导-pHPLC等多种分离纯化技术分离制备泽泻中主要活性成分。共分离得到24种化合物:十七烷酸、棕榈酸、二十烷酸、β-谷甾醇、11-去氧泽泻醇B、23-乙酰泽泻醇B、泽泻醇B、泽泻醇G、23-乙酰泽泻醇L、24-乙酰泽泻醇A、泽泻醇A、24-乙酰泽泻醇F、泽泻醇L、13,17-环氧-23-乙酰泽泻醇B、13,17-环氧泽泻醇B、23-乙酰泽泻醇C、泽泻醇F、13,17-环氧-24-乙酰泽泻醇A、13,17-环氧泽泻醇A、16-羰基-11-脱水泽泻醇A、泽泻醇C、16-羰基-24-乙酰泽泻醇A、16-羰基泽泻醇A和16-羰基-11-去氧泽泻醇A。初步探明了泽泻的物质基础。  2.首先采用HPLC-DAD-Q-TOF MS定性出泽泻中25个成分,通过与对照品比对其紫外、精确分子量和质谱裂解规律,鉴定出21种三萜类化合物,另外4种(其中16-羰基-11-去氧泽泻醇A为新化合物)通过比对其紫外、精确分子量和质谱裂解规律,被推断出来。其次建立了UPLC-QqQ MS的定量分析方法,并应用到20批主产地泽泻药材的定量测定中。进一步阐明不同产地泽泻的内在化学成分的异同。  3.建立了一测多评(QAMS)的泽泻多指标质量控制方法,采用HPLC法,以23-乙酰泽泻醇B为内参物,计算泽泻醇A、24-乙酰泽泻醇A和泽泻醇B的相对校正因子,并利用该校正因子计算含量,同时与采用外标法测定4个三萜类成分的含量进行比较。结果:建立的校正因子重现性良好,31批泽泻药材中4个三萜类的含量计算值与外标法实测值间(RSD≤3.52%)无显著差异。证明建立的一测多评法稳定、准确,可用于泽泻三萜类成分的质量控制。解决了泽泻质量控制中对照品难得,货源不足或价格昂贵等问题。  4.采用代谢笼法研究泽泻三萜类成分的利尿作用,得出三萜类成分是其利尿药效物质基础。在遵循组分配伍研究设计的基础上,采用均匀设计法,以尿量为主要药效指标,研究泽泻利尿作用。优化出最佳的利尿活性组合23-乙酰泽泻醇B:泽泻醇B:24-乙酰泽泻醇A:泽泻醇A:23-乙酰泽泻醇C(7.4∶4.4∶2.0∶1.4∶1.1),并进行三次验证,结果优化的最优组合与软件计算的预期值接近,结合建泽泻、川泽泻含量测定的结果,发现建泽泻的内部构成比更接近于最佳比例,优于川泽泻。
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