【摘 要】
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本研究将黄色荧光蛋白报告基因(YFP)融合乙胺嘧啶抗性筛选基因(DHFR)插入同一表达框、外源抗原基因插入另一表达框构成双框表达载体,经限制性内切酶介导转染和缓艾美耳球虫子
【机 构】
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中国农业大学动物医学院国家动物寄生原虫实验室,北京100193
【出 处】
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中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第七次代表大会暨第十二次学术研讨会
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本研究将黄色荧光蛋白报告基因(YFP)融合乙胺嘧啶抗性筛选基因(DHFR)插入同一表达框、外源抗原基因插入另一表达框构成双框表达载体,经限制性内切酶介导转染和缓艾美耳球虫子孢子,泄殖腔接种1日龄AA肉鸡,在磺胺嘧啶药物的选择压力下进行筛选并连续传代,通过RT-PCR、Western blot、间接免疫荧光和免疫组化对表达的外源基因在基因水平和蛋白水平进行鉴定,并观察筛选虫体内生发育和外生发育阶段表达YFP的情况.结果表明,外源抗原基因在和缓艾美耳球虫中获得了成功表达,且定位于球虫子孢子细胞膜表面；构建成功的两株转基因虫体,分别为表达H9N2禽流感病毒HA1片段的虫体(Emi.HAl)和融合H9N2禽流感病毒HA1片段和鸡IgG Fc片段的虫体(Emi.HAlchFc);与只用黄色荧光进行流式筛选相比,用药物筛选可快速提高转基因球虫的筛选效率,第三代即可达到60％虫体发光,且黄色荧光蛋白可持续表达于球虫的整个生活史阶段.此研究首次实现了和缓艾美耳球虫转染,为和缓艾美尔球虫作为禽流感病毒的疫苗活载体奠定了研究基础,进一步推进鸡艾美耳球虫作为疫苗载体的研究进展.
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