【摘 要】
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目的：建立聚合酶链反应限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)联合等位基因特异性聚合酶链反应(AS-PCR)检测abl基因T315I点突变的方法,以提高abl基因T315I基因突变的检出率.方法
【机 构】
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南昌大学第一附属医院检验科,江西南昌330006
【出 处】
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江西省医学检验第十六次学术交流会议暨王棠海教授百岁华诞学术研讨会
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目的：建立聚合酶链反应限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)联合等位基因特异性聚合酶链反应(AS-PCR)检测abl基因T315I点突变的方法,以提高abl基因T315I基因突变的检出率.方法：通过构建abl基因野生型和T315I突变型重组质粒作为检测对象,设计一对野生型和突变型abl基因序列的通用引物,分别以野生型和T315I突变型质粒作为模板,PCR扩增出目的片段,经RFLP初筛检测abl基因T315I突变情况.再设计一对T315I突变的特异性引物,使得上游引物3末端的碱基与突变体匹配,而与野生型abl不能匹配,且在下游引物3末端的前一位引入错配碱基,增加其特异性,通过AS-PCR对样本进一步检测.结果：PCR扩增出273bp大小的目的片段,经限制性内切酶Dde Ⅰ酶切后,野生型abl基因片段产生141bp、68bp、46bp和18bp 4条片段,而T315I突变型abl基因片段酶切后产生159bp、68bp和46bp 3条片段.PCR-RFLP方法可以检测T315I突变,检测灵敏度为6％.再以酶切产物作为模板进行AS-PCR,通过反应条件的优化,AS-PCR所能检测到的T315I最低突变浓度为0.18％.结论：PCR-RFLP联合AS-PCR检测方法特异性好、灵敏度高,能够给临床检测abl基因T315I突变提供一种新型的检测方法.
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