日本脑炎病毒NS3基因C端的表达与多克隆抗体研制

• 作 者: 邓绪芳;史子学;邱亚峰;沈阳;邵东华;马志永;
• 机 构: 中国农业科学院上海兽医研究所兽医公共卫生研究室,上海 200241
• 出 处: 中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第二次学术研讨会
• 发表日期: 2010年期

获得NS3基因C端重组蛋白、研制抗NS3蛋白的多克隆抗体。根据GenBank发表的SA14-14-2株的序列(AF315119)，设计并合成了1对引物扩增NS3基因C端(955～1857bp)。从感染JEV的细胞样品中提取总RNA，RT-PCR扩增出大小约900bp的片段。通过测序验证正确后，将该片段插入到pET-28a(+)载体，命名为pET-28a-NS3C。
将该质粒转化BL21(DE3)，成功诱导表达出NS3C蛋白。将该蛋白免疫小鼠制备的多抗血清。通过IFA和WB验证，该血清能特异识别JEV感染Vero细胞中的NS3蛋白，大小约72kD，并主要位于感染细胞的胞浆中。