【摘 要】
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本研究参考GenBank中O型FMDV全基因序列,分段设计了9对引物,应用RT-PCR技术对O/HK/2001株的基因组编码区序列进行了克隆和序列测定,获得了该病毒株基因组编码区的核苷酸序列并推导出氨基酸序列.并将O/HK/2001株与14株不同O型FMDV进行序列比较分析,结果表明,该毒株与以HKN/2002株为代表的猪毒群的7个毒株的同源性较高,与香港HKN/2002株遗传关系最近,而与属于泛
【机 构】
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华南农业大学兽医学院,广州,510642
【出 处】
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中国微生物学会兽医微生物学专业委员会2006年学术年会
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本研究参考GenBank中O型FMDV全基因序列,分段设计了9对引物,应用RT-PCR技术对O/HK/2001株的基因组编码区序列进行了克隆和序列测定,获得了该病毒株基因组编码区的核苷酸序列并推导出氨基酸序列.并将O/HK/2001株与14株不同O型FMDV进行序列比较分析,结果表明,该毒株与以HKN/2002株为代表的猪毒群的7个毒株的同源性较高,与香港HKN/2002株遗传关系最近,而与属于泛亚毒的7个毒株同源性较低,其遗传关系也较远.本研究为开展FMD分子流行病学调查及FMDV各基因的功能、分子致病基础研究奠定了基础.
其他文献
为研究猪瘟SM强毒株和HCLV株E2蛋白主要抗原结构域在分子水平和免疫水平上的差异.用PCR技术从重组质粒分别扩增了SM株和HCLV株E2基因的主要抗原结构域ABCD和C片段,分别克隆于pMAL-p2X载体中,经PCR和测序鉴定,E2基因的2个主要抗原结构域片段的位置、大小和读码框均正确.将构建的重组质粒转化到表达菌BL21-CodonPlus(DE3)-RP,对表达产物进行SDS-PAGE电泳和
根据猪流感病毒M基因的序列分析结果,设计了一对扩增M基因特异性引物.采用该技术对H1、H3、H5和H9 4个亚型猪流感病毒标准参考株,RT-PCR检测的结果都呈阳性,对猪副粘病毒、圆环病毒2型、猪呼吸与繁殖综合症病毒、猪伪狂犬病毒RT-PCR扩增结果都呈阴性.RT-PCR最少可检测到1000EID50的病毒核酸.采用该对引物,直接从猪流感病毒感染小鼠的组织样品中提取核酸,RT-PCR阳性结果和鸡胚
目的:建立一种高效、简便的实时荧光定量PCR方法,用于猪圆环病毒2型定性及定量的检测.方法:利用PCR技术扩增猪圆环病毒2型ORF2保守区基因107bp片段并克隆到pMD-19-T载体上,纯化的质粒作为PCR检测的标准模板,以10倍梯度稀释质粒为标准模板,进行荧光定量PCR扩增猪圆环病毒2型基因片段并绘制标准曲线,然后以提取的PCV-2、PCV-1、PPV和PRV的DNA作为模板,采用同样体系进行
本试验建立了SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR方法检测PCV-2.分析表明,10倍系列稀释的标准质粒9个点均在一条直线上,二者相关系数R2＞0.999,扩增效率达到97％.敏感性、特异性及重复性实验证明,批间、批内重复试验的变异系数均小于1.5％;可检测10-5.5TCID50.40份被检样品,SyReTi-PCR检测阳性率为87.5％,与普通PCR检测的符合率为94.6％,其敏感性是普通
根据GenBank中猪圆环病毒2型(PCV-2)ORF2基因序列设计一对引物,应用PCR从含有PCV-2的PK-15细胞中扩增出ORF2基因片段,回收PCR产物,将其克隆入pMD18-T载体,获得重组质粒pTORF2,并对其进行序列测定.重组质粒经BamHI、XnolI双酶切,回收ORF2基因,,定向克隆到表达载体pET-32a中并转化大肠杆菌Rosetta,进行原核表达.用此表达产物包被酶标板,
猪圆环病毒2型(Porcine circovirus-2,PCV-2)是导致猪断奶后多系统衰弱综合征(Postweaning muhisystemic wasting syndrome,PMMS)的重要病因,并与猪皮炎、肾病综合征(PDNS)、先天性颤抖病、间质性肺炎等有密切关系.多发生在5～12周龄的小猪,主要表现呼吸急促或困难,贫血.淋巴结病变和进行性消瘦.它常与猪呼吸与繁殖综合征病毒(PRR
采用PCR扩增连接的方法将LacZ基因、口蹄疫病毒结构蛋白基因P1-2A基因按正确的读码框依次连接克隆入pMD-18T载体.将切取的LacZ基因插入伪狂犬病毒gI-/gE-质粒pIESneo载体中以替换neo,构建转移载体pIESZ.然后,将FMDV衣壳蛋白基因P1-2A插入转移载体pIESZ BamH Ⅰ位点,构建携带FMDV免疫原基因的重组伪狂犬病毒转移载体pIESZ-P1.重组转移载体经测序
为了研究狂犬病毒作为载体表达外源基因的特性,本研究采用反向遗传操作技术,获得了携带流感病毒HA基因的重组狂犬病毒(HFHA),并进行了病毒传代与HA基因表达的研究.结果显示,重组病毒经BHK-21细胞传代10次,病毒表达稳定,但各代次常规病毒红细胞凝集试验均为阴性;Western-blotting检测到病毒表达产物中存在部分HA蛋白的表达,与HA裂解的HA1蛋白分子量相吻合.
2002年从山东猪群中分离到1株H9N2亚型猪流感病毒(SIV)A/Swine/Shandong/1/02(H9N2),进行了全病毒基因序列分析.结果表明,该毒株8个基因的核苷酸序列均来自禽流感病毒(AIV),与1997年分离株A/Duck/Hong Kong/Y280/97(H9N2)具有很高的同源性(94.1％-98.9％),与1994年的A/Chicken/Beijing/1/94(H9N2
根据GenBank已发表O型FMDVP1基因序列,应用Primers5.0软件设计特异性引物,以O/DG/2005株为模板,扩增其中的P1完整基因序列.将所扩增的基因片断插入伪狂犬病病毒gI/E基因缺失转移载体pIESLacZ的BamH Ⅰ酶切位点,经PCR方法和限制性酶切方法鉴定该基因已成功插入了转移载体并且插入方向正确,获得了重组伪狂犬病毒转移载体pIESLacZP1,此转移载体可与伪狂犬病病