【摘 要】
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目的 构建SHH基因的重组慢病毒表达载体,并转染人胃癌BGC-823、SGC-7901、MKN-45细胞系,观察SHH基因的表达,为SHH基因功能研究奠定基础.方法 应用RT-PCR技术获得人SHH基
【出 处】
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2012年安徽省消化、消化内镜学术年会
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目的 构建SHH基因的重组慢病毒表达载体,并转染人胃癌BGC-823、SGC-7901、MKN-45细胞系,观察SHH基因的表达,为SHH基因功能研究奠定基础.方法 应用RT-PCR技术获得人SHH基因,并将其连接到含有增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因的慢病毒表达载体pGC-FU中.重组获得慢病毒质粒pGC-FU-SHH-GFP和辅助包装质粒一起共转染293T细胞,孔稀释法测定慢病毒滴度.所获得重组的慢病毒感染人胃癌BGC-823、SGC-7901、MKN-45细胞,荧光显微镜观察绿色荧光蛋白和Western blot方法检测SHH在人胃癌BGC-823、SGC-7901、MKN-45细胞的表达.结果 重组慢病毒质粒pGC-FU-SHH-GFP酶切鉴定结果与目的基因条带吻合,克隆测序结果与NCBI收录的SHH基因序列完全一致.重组慢病毒质粒可高效转染293T细胞,慢病毒滴度为1× 108 TU/ml.收集慢病毒上清液感染人胃癌BGC-823、SGC-7901、MKN-45细胞,荧光显微镜下观察95％细胞表达绿色荧光.感染后人胃癌BGC-823、SGC-7901、MKN-45细胞SHH稳定高表达.结论 成功构建了携带SHH与GFP融合基因的慢病毒表达载体pGC-FU-SHH-GFP,获得了SHH基因稳定表达的人胃癌BGC-823、SGC-7901、MKN-45细胞系.该细胞系可作为研究SHH基因功能研究的可靠细胞模型.
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