洛克沙生促内皮细胞生长及其VEGF/KDR的调节作用

来源 :2013年中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十二次学术讨论会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:laoyet
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  [目的]研究洛克沙生促内皮细胞生长及可能的VEGF/KDR调节作用.[方法]大鼠内皮细胞在含0.1mg/mL肝素钠、5 ng/mL VEGF、20%胎牛血清的DMEM培养液中培养.试验分为10.00、1.00、0.10、0.01 μM洛克沙生;1.00 μM洛克沙生与VEGF受体Ⅰ(FLT)和Ⅱ(KDR)的抗体(10 ng/mL)共作用组(1.00 μM +Anti-FLT、1.00 μM +Anti-KDR);10 ng/mL VEGF阳性对照和PBS阴性对照组;另设Anti-FLT、Anti-KDR、Anti-VEGF对照组.内皮细胞培养6h后,MTT法检测细胞的活力,ELISA试剂盒检测培养上清中VEGF的分泌量及Werstern Blot检测细胞中VEGF的表达.[结果]0.10~10.00μM洛克沙生及VEGF处理细胞活力显著高于PBS对照,1.00 μM组OD值最高;1.00μM+Anti-KDR组显著低于1.00 μM组;1.00 μM +Anti-FLT组与1.00μM红无显著差异;Anti-KDR和Anti-VEGF组显著低于PBS对照,而Anti-FLT与PBS无显著差异.洛克沙生具有明显的促内皮细胞生长的作用,且促内皮细胞生长作用与VEGF、KDR有关.培养上清中VEGF测定:0.10~10.00 μM洛克沙生组显著高于PBS对照组,且1.0 μM组最高;1.00 μM +Anti-KDR组显著高于1.00 μM组;1.00 μM +Anti-FLT组与1.00μM组无显著差异;而AntiKDR和Anti-FLT分别低于1.00μM+Anti-KDR和1.00μM+Anti-FLT组.表明洛克沙生可刺激内皮细胞分泌VEGF,阻断FLT对细胞上清中VEGF无明显影响,而阻断KDR后VEGF的分泌明显上升.Western Blot检测表明0.10~10.00μM洛克沙生组的VEGF表达均显著高于PBS对照,且1.00 μM组表达最强.1.00 μM +Anti-KDR组显著低于1.00 μM组;1.00 μM +Anti-FLT组与1.00μM组无显著差异.(显著水平P=0.05).[结论]洛克沙生在0.1 ~10.00 μM范围内有明显的促血管内皮细胞生长作用,1.00μM时作用最强,且VEGF和KDR在洛克沙生促血管生成中具有调节作用.
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