【摘 要】
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目的：应用腺病毒为载体在体外过表达Hsp75基因,研究Hsp75蛋白过表达对神经干细胞在Aβ诱导神经毒性中的保护作用,并初步探讨其作用机制.方法：体外培养小鼠神经干细胞C17.2,实验分为对照组、Aβ处理组、腺病毒阴性感染组、腺病毒Hsp75过表达感染组.使用荧光显微镜观察腺病毒的感染情况、细胞免疫鉴定;倒置相差显微镜观察各组神经干细胞的形态;MTT法检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡率;Wes
【机 构】
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南方医科大学珠江医院药剂科,广东 广州 510282;广东省中西医结合医院药事管理科,广东佛山528200
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目的：应用腺病毒为载体在体外过表达Hsp75基因,研究Hsp75蛋白过表达对神经干细胞在Aβ诱导神经毒性中的保护作用,并初步探讨其作用机制.
方法：体外培养小鼠神经干细胞C17.2,实验分为对照组、Aβ处理组、腺病毒阴性感染组、腺病毒Hsp75过表达感染组.使用荧光显微镜观察腺病毒的感染情况、细胞免疫鉴定;倒置相差显微镜观察各组神经干细胞的形态;MTT法检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡率;Western blot检测Hsp75和活化caspase-3蛋白的表达.
结果：荧光显微镜观察和Western blot检测表明腺病毒成功感染神经干细胞并高效表达Hsp75蛋白.此外,腺病毒感染不会导致细胞形态的改变及细胞的分化,同时也不会影响细胞的活力.与对照组比较,Aβ处理组及腺病毒阴性感染组细胞存活率显著降低(p＜0.05),细胞凋亡率及caspase-3蛋白表达显著增高(p＜0.05);然而,Hsp75过表达能显著地提高神经干细胞的存活率(p＜0.05),减少细胞凋亡(p＜0.05)和降低caspase-3蛋白的表达(p＜0.05).
结论：Hsp75过表达对Aβ诱导损伤的C17.2细胞具有明显保护作用,其机制可能是与抑制caspase-3途径依赖的细胞凋亡有关.
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