【摘 要】
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目的：人肿瘤抑素(tumstatin)可以抑制肿瘤新生血管的生成,通过用99Tcm标记tumstatin,进行肿瘤的放射受体显像,具有重要和潜在的临床应用价值.克隆tumstatin基因,重组表达t
【机 构】
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中国医学科学院放射医学研究所天津分子核医学重点实验室,天津300192
【出 处】
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第七届中国核学会“三核”论坛暨中国毒理学会放射毒理委员会第八次全国会议
论文部分内容阅读
目的：人肿瘤抑素(tumstatin)可以抑制肿瘤新生血管的生成,通过用99Tcm标记tumstatin,进行肿瘤的放射受体显像,具有重要和潜在的临床应用价值.克隆tumstatin基因,重组表达tumstatin蛋白,为人tumstatin的肿瘤放射受体显像奠定基础.方法：从HEK293细胞中提取总RNA,通过RT-PCR扩增tumsta-tin cDNA,导入克隆载体pMD19-T,再转化E.coli DH5α,挑选阳性克隆,测定基因序列.然后双酶切克隆载体目的基因,插入原核表达载体pET28a中,转化E.coli BL21 (DE3),IPTG诱导重组蛋白的表达,并对表达产物进行SDS-PAGE分析,western blot进行鉴定,通过MTT法检测tumstatin对卵巢癌细胞系ES-2增殖的影响.结果：提取的RNA经电泳有明显的28S,18S,5S三条带,且28S,18S亮度之比约为2：1.RT-PCR扩增产物经琼脂糖电泳与理论值750bp相一致.酶切鉴定和DNA测序证实tumstatin基因正确地插入表达载体中,序列100％正确.重组tumstatin在大肠杆菌中获得高效表达,其分子量约为29kD,表达量约占菌体总蛋白量的30％.通过MTT实验,证实了其具有抑制肿瘤细胞生长的生物学活性.结论：tumstatin基因原核表达载体成功的构建和重组人tumstatin蛋白在大肠杆菌中的高效表达,为进一步的tumstatin的放射受体显像奠定基础.
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