【摘 要】
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目的 从甲基化机制上阐明妊娠期正己烷暴露对于子代卵巢发育和功能的影响.方法 Wistar孕鼠孕期1～20日分别暴露于正己烷0,100,500, 2500和12500 ppm,静式吸入染毒,4h·d-1,F1代雌鼠出生后56 d取卵巢,观察病理和卵泡数目构成比.然后分离F1代大鼠的卵巢颗粒细胞,提取基因组DNA与5-mC抗体免疫共沉淀,再与Nimblegen 385K Promoter Plus C
【机 构】
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福建医科大学公共卫生学院,福建福州350108
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目的 从甲基化机制上阐明妊娠期正己烷暴露对于子代卵巢发育和功能的影响.方法 Wistar孕鼠孕期1～20日分别暴露于正己烷0,100,500, 2500和12500 ppm,静式吸入染毒,4h·d-1,F1代雌鼠出生后56 d取卵巢,观察病理和卵泡数目构成比.然后分离F1代大鼠的卵巢颗粒细胞,提取基因组DNA与5-mC抗体免疫共沉淀,再与Nimblegen 385K Promoter Plus CpG Island Arrays杂交,以启动子区探针Peak Score ＞2并和对照组有差别为标准筛选差异甲基化基因.将差异甲基化基因导入DAVID数据库进行以下分析：Gene Ontology Consortium方法注释差异性甲基化基因、差异性甲基化基因DAVID聚类分析、DAVID聚类基因Pm value值二项聚类分析组间甲基化模式差异、差异甲基化基因KEGG信号通路分析.结果 12500 ppm组的次级卵泡比例显著低于对照组(P＜0.05),闭锁卵泡比例显著高于对照组(P＜0.05).正己烷暴露组共同基因中,去甲基化基因多于高甲基化基因,正己烷的甲基化效应主要与细胞过程、代谢过程、细胞内基因和磷酸转移酶活性基因有关.在细胞死亡、细胞生长和激素调控聚类中,对照和500 ppm组的甲基化模式比较接近,2500和12 500 ppm组的甲基化模式相对接近.凋亡通路中12 500ppm组促凋亡基因Bad启动子区低甲基化,500 ppm组凋亡促进基因NFKBIA,Bid,Casp7,Dffb启动子区高甲基化.在激素合成通路,2500和12500 ppm组Cyp11a1,Cyp17a1,Hsd3b1和Srd5a1基因启动子区的高甲基化.结论 妊娠期正己烷暴露能影响F1代雌性大鼠的卵巢发育,并能改变子代卵巢颗粒细胞的DNA启动子区甲基化状态,其中高剂量的正己烷暴露(2500和12 500 ppm)能明显改变颗粒细胞凋亡基因和激素合成基因的甲基化状态.
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