【摘 要】
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氧自由基和DNA的碱基反应可形成8-oxodG,导致G∶C向T∶A突变。为了更好地认识酵母DNA聚合酶Polη在8-oxodG上插入单个dNTP的分子过程,我们采用稳态前动力学方法研究了酵
【机 构】
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第三军医大学军事预防医学院毒理学研究所,重庆400030
【出 处】
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中国毒理学会第七次全国毒理学大会暨第八届湖北科技论坛
论文部分内容阅读
氧自由基和DNA的碱基反应可形成8-oxodG,导致G∶C向T∶A突变。为了更好地认识酵母DNA聚合酶Polη在8-oxodG上插入单个dNTP的分子过程,我们采用稳态前动力学方法研究了酵母DNA聚合酶Polη的催化区域(Polηcore,氨基酸1-513)进行单个dNTP插入的基元步骤。采用Polηcore而不是全长的Polη可以消除C端C2H2结构域对dNTP插入的潜在影响。发现,Polηcore在8-oxodG上最优先地插入dCTP,并且此碱基对最容易被延伸。但是Po1ηcore并没有显示快速的burst特性,说明dNTP插入效率不会高于聚合酶从DNA上解离的速率。通过LC-MS/MS分析通过8-oxoG的延伸产物,发现57％的产物对应于dCTP的插入而43％对应于dATP的插入。与全长的Polη相比,Polηcore降低了8-oxodG的错配效率,增加了通过8-oxodG忠实性,却加速了从8-oxodG∶A错配末端的延伸效率。该研究揭示了酵母DNA聚合酶Polηcore通过8-oxodG的动力学过程,对于进一步理解氧化损伤导致的DNA复制突变机制具有重要意义。
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