【摘 要】
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目的 观察肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)促进内皮细胞向间质细胞转化[endothelial-mesenchymal(myofibroblast)transition,EnMT]的效应,探讨肌成纤维细胞的来源及纤维化疾病发生的新机制.方法 将分离培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC),应用不同浓度的TNF-α刺激(5、10、25、50和100ng/
【机 构】
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第三军医大学第三附属医院野战外科研究所,创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室
【出 处】
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第八届全国创伤修复(愈合)与组织再生学术交流会
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目的 观察肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)促进内皮细胞向间质细胞转化[endothelial-mesenchymal(myofibroblast)transition,EnMT]的效应,探讨肌成纤维细胞的来源及纤维化疾病发生的新机制.方法 将分离培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC),应用不同浓度的TNF-α刺激(5、10、25、50和100ng/ml)]72 h,在倒置显微镜下观察细胞的形态变化,免疫荧光检测细胞FⅧ因子相关抗原和平滑肌肌动蛋白-α (α-SMA)的表达变化并计数双阳性细胞,RT-PCR检测VE-钙粘蛋白(VE-Cadherin),α-SMA和Ⅰ型胶原基因表达变化.结果 分离培养的正常HUVEC细胞倒置显微镜下呈典型上皮细胞样形态,细胞间连接紧密呈“典型铺路石样”生长,几乎所有细胞FⅧ因子免疫荧光染色阳性.不同浓度的TNF-α处理后,细胞不仅形态发生明显改变,由“铺路石样形态”向梭形形态转化,并且FⅧ因子和α-SMA双免疫荧光染色显示：随着TNF-α刺激浓度的增加,FⅧ阳性细胞减少且绿色荧光强度减弱,而α-SMA阳性细胞增多且红色荧光增强,表现为FⅧ因子和α-SMA双阳性细胞显著增多(P＜0.01),这一改变呈明显的TNF-α浓度依赖形式；同样,RT-PCR结果也显示,VE-钙粘蛋白(VE-cadherin)基因的表达的减少(P ＜0.05, P＜0.01)、α-SMA基因的表达的增加(P＜0.05,P＜0.01)和细胞合成Ⅰ型胶原的能力的增加(P＜0.05)等改变呈明显的TNF-α浓度依赖.结论 促炎细胞因子TNF-α具有明显的浓度依赖性地促进内皮细胞向间质细胞转化(EnMT)的作用,提示EnMT可能是慢性炎症疾病和异常创伤愈合(瘢痕)过程中的纤维化组织内肌成纤维细胞的又一重要来源.
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