【摘 要】
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目的:探讨Hep3B细胞中调控cyclin D1过表达的分子机制.
方法:提取正常肝细胞LO2和肝癌细胞Hep3B的总RNA和蛋白,RT-qPCR和Western blot法检测cyclin D1的mRNA和蛋白表达水
【机 构】
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大连医科大学实验动物中心116044
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目的:探讨Hep3B细胞中调控cyclin D1过表达的分子机制.
方法:提取正常肝细胞LO2和肝癌细胞Hep3B的总RNA和蛋白,RT-qPCR和Western blot法检测cyclin D1的mRNA和蛋白表达水平以及细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)、磷酸化ERK 1/2(p-ERK1/2)、磷酸化雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)、NF-κB抑制蛋白α亚基(IkBa)的蛋白表达水平.ERK、mTOR、NF-κB抑制剂处理Hep3B细胞,检测cyclin D1的mRNA和蛋白表达变化.
结果:与LO2相比,Hep3B中cyclin D1的mRNA和蛋白表达水平分别升高115.73倍(t=36.617,P＜ 0.001)和22.60倍(t=8.457,P＜0.001),p-ERK1、ERK1、p-mTOR的蛋白表达水平分别升高10.87倍(t=5.903,P=0.004)、24.77倍(t=23.284,P=0.002)和20.60倍(t=24.492,P＜ 0.001),IκBα的蛋白表达水平没有显著差异(t=35.923,P=0.058).ERK抑制剂PD184352处理Hep3B细胞,对p-mTOR蛋白表达水平没有明显影响,但cyclin D1的mRNA表达水平显著下降(F=52.53,P＜ 0.001).其蛋白表达水平也随之在6-24h明显降低.mTOR抑制剂Rapamycin处理Hep3B细胞,明显提升了p-ERK蛋白的表达水平和显著升高了cyclinD1mRNA的表达水平(F=587.47,P=0.002),但cyclin D1的蛋白表达水平在6-24h明显降低.同时用ERK和mTOR的抑制剂处理Hep3B细胞,与ERK抑制剂的处理结果相同.NF-κB抑制剂BAY11-7082处理Hep3B细胞对cyclin D1的mRNA和蛋白表达水平没有明显影响.
结论:ERK1和mTOR是调控Hep3B细胞cyclin D1表达主要信号分子.mTOR对ERK的抑制作用可能是维持适当cyclin D1蛋白水平的重要调控机制.
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