【摘 要】
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目的：研究MGF促离体培养的骨骼肌卫星细胞增殖的最佳浓度,并观察该浓度对细胞生长曲线、总蛋白及凋亡情况的影响.方法：选用雄性SD大鼠1只,无菌条件下取后肢肌肉,采用改进的
【机 构】
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上海体育学院运动科学学院,上海200438
【出 处】
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2010年中国运动生理生化学术会议
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目的：研究MGF促离体培养的骨骼肌卫星细胞增殖的最佳浓度,并观察该浓度对细胞生长曲线、总蛋白及凋亡情况的影响.方法：选用雄性SD大鼠1只,无菌条件下取后肢肌肉,采用改进的两步酶消化法结合差速贴壁技术,分离及纯化骨骼肌卫星细胞.取第3代骨骼肌卫星细胞,分别用终浓度为15、25、50、100、200ng/ml MGF进行干预,作为实验组；以单纯加入100μl生长培养基作为对照组,以加入100μl DMEM作为阴性对照组.同步化后,于培养24h后加入CCK-8溶液.CCK-8比色法检测细胞增殖情况并绘制生长曲线,同时运用BCA法及Hoechst 33342、PI双染法测定该浓度MGF对卫星细胞蛋白合成及细胞凋亡的影响.免疫细胞化学法鉴定骨骼肌卫星细胞.结果：①除200ng/ml外,其他浓度的MGF均有促进骨骼肌卫星细胞增殖的作用(p＜0.01),其中25ng/ml时其促增殖作用接近顶峰.②与对照组相比,MGF组细胞生长曲线左移,倍增时间、平台期均有缩短.③与对照组相比,随培养时间的延长,25ng/ml MGF作用48h即对骨骼肌卫星细胞有明显的增殖效果(p＜0.05)；与对照组相比,25ng/ml MGF作用骨骼肌卫星细胞48 h和72h时,其总蛋白含量增加(p＜0.05)；从两组平均凋亡指数的统计学比较结果可以看出,与对照组相比,25ng/ml MGF作用48h、72h,骨骼肌卫星细胞的凋亡程度显著被抑制(p＜0.05,p＜0.01).结论：①机械生长因子可促进体外培养的大鼠骨骼肌卫星细胞增殖,最佳浓度为25ng/ml；②25ng/ml MGF可以使骨骼肌卫星细胞提前进入平台期,缩短生长周期；③25ng/ml MGF可以抑制骨骼肌卫星细胞的凋亡.
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