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竹子是多年生常绿的植物,是禾本科最大的类群之一,不同于水稻、玉米等其他禾本科植物,竹子具有特殊的开花习性,强大的无性繁殖能力以及快速生长的特性.这些特点一直以来备受关注,但是对其内在的分子机理迄今还知之甚少.绿竹(Bambusa oldhamii)作为竹类中具有重要经济价值的竹种,长期受到开花的的困扰,造成竹子成片死亡,对生态环境和社会经济带来很大的影响,因此对竹子开花的研究具有十分重要的意义.在开花植物的发育过程中,植物MADS-Box基因起到重要的调控作用,花分生组织的特性和花器官特性都是MADS-Box基因决定和调控的,AP3基因作为MADS-box基因家族的一员,主要调控花瓣和雄蕊的发育.为了进一步探讨AP3在绿竹花器官分化中的作用,我们利用RACE方法克隆了绿竹AP3的同源基因,并对其进行了初步的研究.主要结果如下：1.通过对多个物种的AP3基因序列比较,根据相对保守的核苷酸序列设计引物,利用RACE技术从绿竹的开花试管苗中克隆得到了AP3基因的全长cDNA,命名为BoAP3,序列分析表明,该基因包含一个完整的ORF,长度为654bp,编码218个氨基酸,与小麦的AP3基因和水稻AP3基因的序列同源性最高,分别为87％,89％.2.应用Prosite预测BoAP3蛋白结构域,发现BoAP3蛋白具有典型的MADS-Box结构,有两个保守的结构域,MADS结构域和K结构域,分别含有61个氨基酸和90个氨基酸,表明BoAP3蛋白属于MADS-box基因家族. 3.在NCBI上查找已经克隆出来的12个不同物种的AP3同源基因进行聚类分析,系统进化树表明,绿竹的AP3与水稻的OsMADS16及小麦的APE3聚为一类,亲缘关系较近. 4.通过定量PCR对该基因的表达进行了分析,BoAP3基因在绿竹的开花试管苗和营养生长试管苗中均有表达,发现BoAP3在开花试管苗的表达量高于营养生长试管苗,是营养生长试管苗的6倍,BoAP3基因在绿竹的营养生长阶段表达量较低,而到了生殖生长阶段表达量明显上升,说明该基因可能参与了维持绿竹的生殖生长. 5.利用SmaI/KpnI双酶切,成功构建了植物表达载体PC1301—BoAP3,并转化农杆菌GV1301.对绿竹的Kan筛选压进行了鉴定,确定其合适的筛选压为30mg/L.由于竹子的转基因体系还没有成功建立,利用农杆菌介导法,将表达载体PC1301—BoAP3转化拟南芥,获得转基因植株. 6.成功构建了绿竹AP3ORF全长的蛋白表达载体,经IPTG诱导后分别在20℃过夜培养和37℃培养6小时,超声破碎菌体后离心收集上清样品,SDS-PAGE电泳检测发现BoAP3蛋白在20℃和37℃中都有表达,均以包涵体形式存在.