HCV NS3蛋白单克隆抗体的制备及其识别区域的分析

• 作 者: 尹文;杨敬;薛小平;雷迎峰;吕欣;韦三华;胡兴斌;孙梦宁;徐志凯;
• 机 构: 第四军医大学微生物学教研室,西安 710032
• 出 处: 2006年全国生化与生物技术药物学术年会
• 发表日期: 2006年期

用原核表达的HCV非结构区NS3全长蛋白作为免疫原，采用小鼠腹股沟皮下NC膜包埋法免疫小鼠，按常规杂交瘤细胞的制备方法，经细胞融合、克隆化制备抗NS3蛋白的MAb。用间接免疫荧光法和Western-blot鉴定其特异性.分别构建NS3丝氨酸蛋白酶(NS3蛋白的N末端1／3)编码基因的真核表达质粒pcDNA3.1(-)-ns3p、NS3解旋酶(NS3蛋白的C末端2／3)编码基因的真核表达质粒pcDNA3.1(-)-ns3h，将其瞬时转染COS-7细胞后，以获得的单克隆抗体作为一抗，通过免疫荧光分析获得单抗识别表位所在的区域.结果获得了2株抗NS3蛋白的单克隆抗体，这2株MAbs均特异识别NS3蛋白，并确定了它们的结合区域，为下一步进行以NS3蛋白为靶位的抗HCV研究奠定了基础.