【摘 要】
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[目的]黄翅大白蚁(Macrotermes barneyi,Isoptera：Macrotermitidae)是一种与真菌共生,广泛分布于我国南方的高等培菌白蚁,前期本实验室对该种白蚁的整个肠道进行了转录组测序,发现两个功能注释为几丁质酶的unigenes基因(comp174658_c0和comp 182537_c0)在中肠和后肠的表达量都在500以上.为了解这两个基因在肠道中起的作用,本研究分别
【机 构】
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山东大学生命科学学院/微生物技术国家重点实验室,泰安,250100
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[目的]黄翅大白蚁(Macrotermes barneyi,Isoptera：Macrotermitidae)是一种与真菌共生,广泛分布于我国南方的高等培菌白蚁,前期本实验室对该种白蚁的整个肠道进行了转录组测序,发现两个功能注释为几丁质酶的unigenes基因(comp174658_c0和comp 182537_c0)在中肠和后肠的表达量都在500以上.为了解这两个基因在肠道中起的作用,本研究分别对上述两个基因进行了基因克隆和表达研究.[方法]通过RT-PCR获得白蚁肠道各个部分的cDNA全长,然后构建表达载体在大肠杆菌中异源表达,进一步确认表达后,再通过几丁质酶活性测试,验证表达产物是否具有降解几丁质的能力.[结果]Unigenes基因comp174658_c0：全长为1227 bp,包含一个1194 bp的开放阅读框,编码的氨基酸长度为397个氨基酸,其中包含一个22个氨基酸长度的信号肽,预测分子量为41.1 kDa.BLAST比对发现该基因与内华达古白蚁来源的几丁质酶的同源性是60％.Unigenes基因comp182537_c0全长为1413 bp,包含一个1404 bp的开放阅读框,编码的氨基酸长度为467个氨基酸,其中不包含信号肽,预测分子量为51.26kDa,该蛋白含有一个大概100个氨基酸长度的几丁质结合域,BLAST比对发现该基因与台湾乳白蚁来源的几丁质酶的同源性是50％.这两个基因所编码的目的蛋白均在大肠杆菌中表达,并且其表达产物具有降解胶体几丁质的能力.[结论]本实验证明这两个基因所编码的蛋白都具有降解几丁质的能力.由于中肠和后肠是黄翅大白蚁消化摄取营养的主要场所,这两种蛋白在白蚁肠道中所起的作用可能是降解真菌的细胞壁来达到抵抗致病真菌的入侵,也可能是降解鸡枞菌孢子,使孢子内含物释放出来,一同完成木质纤维素的降解.但是具体的作用还需要进一步实验确认.
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