【摘 要】
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目的 肿瘤的基因治疗成为近年研究重点,其关键在于如何安全、高效地将外源基因导入细胞.转染效率较理想的病毒载体存在免疫原性、致畸变性限制了其应用,超声介导微泡破坏
【机 构】
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重庆医科大学超声影像学研究所,重庆医科大学附属第二医院超声科,重庆,400010
【出 处】
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2012年十一届全国超声心动图学术会议暨新技术国际研讨会
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目的 肿瘤的基因治疗成为近年研究重点,其关键在于如何安全、高效地将外源基因导入细胞.转染效率较理想的病毒载体存在免疫原性、致畸变性限制了其应用,超声介导微泡破坏增强基因转染被认为是最具发展潜力的非病毒载体之一,已证实能够在体内及体外增强多种细胞的基因转染.通过自制阳离子微泡,研究超声介导其破坏增强基因转染的效果,并与普通脂质微泡做对比研究,寻找一种更可靠、完善的基因载体工具.方法 采用水浴机械震荡法,加入DC-胆固醇,制备阳离子微泡,观察其物理特性,并检测其体外载基因能力.将微泡和质粒DNA以不同的处理组：①单纯质粒组(P)；②质粒+超声辐照组(P+US)；③质粒+阳离子脂质微泡组(P+M+)；④质粒+普通脂质微泡+辐照组(P+US+M-)；⑤质粒+脂质体组(P+L)；⑥质粒+阳离子微泡+辐照(P+US+M+)组,分别加入培养的人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC),选择优化的辐照参数,固定频率1 MHz,声强为0.5 W/cm2,时间60s.辐照完毕后,将细胞转入24孔培养板中,孵箱内孵育6～8 h,换完全培养基,培养24～48 h后,观察转染率.并探讨不同微泡浓度对细胞存活率的影响,应用荧光显微镜观察绿色荧光蛋白(EGFP)的表达,流式细胞仪检测基因转染率,MTT法分析细胞存活率.结果 制备的阳离子微泡形态规整、大小分散度好,阳离子微泡浓度固定,载基因率最大为39.7％.超声联合阳离子微泡能够增强基因转染,与普通脂质微泡组比差异有显著性,荧光显微镜下可见(P+US+M-)组、(P+US+M+)及(P+L)组荧光表达量明显高于其他各组,且(P+US+M+)组明显高于(P+US+M-)组.发现超声辐照参数固定,质粒浓度不变,随着微泡浓度增加,细胞存活率降低.结论 研究表明自制的阳离子微泡在一定浓度下,与优化的质粒DNA结合,能够实现较高的基因转染率,且对细胞没有明显的毒性作用,望成为更有效的非病毒载体工具.
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