【摘 要】
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本研究克隆了一个新的刺参半胱氨酸蛋白酶抑制剂(cystatin)基因,研究了该基因及组织蛋白酶L(cathepsin L)基因的组织分布和自溶时序表达变化,以阐明cathepsin L及其内源性抑制剂cystatin在海参自溶过程中的互作关系.采用同源克隆及cDNA末端快速扩增技术克隆cystatin基因,并莉用实时荧光定量法对上述两基因表达进行定量分析.实验结果显示：(1)刺参cystatin
【机 构】
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大连工业大学食品学院,国家海洋食品工程技术研究中心,大连 116034
【出 处】
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中国食品科学技术学会第十届年会暨第七届中美食品业高层论坛
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本研究克隆了一个新的刺参半胱氨酸蛋白酶抑制剂(cystatin)基因,研究了该基因及组织蛋白酶L(cathepsin L)基因的组织分布和自溶时序表达变化,以阐明cathepsin L及其内源性抑制剂cystatin在海参自溶过程中的互作关系.采用同源克隆及cDNA末端快速扩增技术克隆cystatin基因,并莉用实时荧光定量法对上述两基因表达进行定量分析.实验结果显示：(1)刺参cystatin cDNA序列全长662 bp,包括5端非编码区22 bp,3端非编码区292 bp和开放阅读框348 bp,整个开放阅读框编码115个氨基酸,包含cystatin家族3个保守区域.(2)Cathepsin L和cystatin在刺参的管足、背部表皮、呼吸树、肠、纵行肌及体腔细胞中均有表达.在刺参体腔细胞、管足及背部表皮的表达量较高.(3)室温下自溶过程中,在剌参背部表皮,cathepsin L和cystatin表达均出现不同程度的上调,cathepsin L表达水平在24 h出现最大值,是0h的2.6倍,之后表达水平下降,但在48 h过程中的表达水平始终高于0 h；cystatin与cathepsin L的表达规律相似,但24 h后cathepsin L表达量的上调程度显著高于cystatin.结果表明,cystatin及cathepsin L对刺参自溶的应激调控发生于转录水平,两者保持一定的动态平衡,当平衡被打破,cathepsin L表达的显著上调使组织趋于降解,导致自溶.
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