洋葱伯克霍尔德菌脂肪酶的表达、纯化以及其体外复性

来源 :第十六次全国环境微生物学学术研讨会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:alexkent
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  以洋葱伯克霍尔德菌G63脂肪酶为对象,利用大肠杆菌异源高效表达G63脂肪酶及其折叠酶;探讨折叠酶/脂肪酶摩尔比、温度、时间、pH以及蛋白质浓度等因素对脂肪酶的体外复性的影响,在体外实现G63脂肪酶的折叠复性.结果表明,G63脂肪酶以包涵体的形式高效表达,含量达到50 mg/g·湿细胞,纯化并用变性剂脲(8mol/L)溶解,蛋白质浓度为4.09 mg/mL;折叠酶以可溶蛋白的形式表达,纯化后的蛋白质浓度为0.67mg/mL.在折叠酶辅助的G63脂肪酶体外复性过程表明:当脂肪酶浓度较低(0.8 μg/mL),在折叠酶/旨肪酶摩尔比1:1,pH7.0及15℃的条件下,复性5小时脂肪酶比活力达到1514.0 U/mg;当脂肪酶浓度较高(80 μg/mL)时,在相同复性条件下,复性40小时,脂肪酶比活力达到2284.8U/mg.
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