【摘 要】
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为了克隆带His标签的鸡IL-17A基因,优化其蛋白复性条件从而获得大量高纯度的鸡IL-17A,为鸡IL-17A功能的研究提供基础.从本实验已构建的PGEX-6p1-chIL-17A,设计引物PCR扩增chI
【机 构】
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中国农业大学动物医学院,国家动物原虫实验室,北京,100193
【出 处】
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中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第七次代表大会暨第十二次学术研讨会
论文部分内容阅读
为了克隆带His标签的鸡IL-17A基因,优化其蛋白复性条件从而获得大量高纯度的鸡IL-17A,为鸡IL-17A功能的研究提供基础.从本实验已构建的PGEX-6p1-chIL-17A,设计引物PCR扩增chIL-17A基因,将其产物和pET-28a载体用BamHI,NotI双酶切重新成功构建了pET-28a-chIL-17A原核表达载体.新构建的载体转化Rosetta(DE3),经1mmol/L IPTG,37℃,4h诱导后包涵体表达出17kDa左右的融合蛋白,与预期大小一致,且Western-blot鉴定表达产物为目的蛋白.在4℃,优化变性和复性条件,采用无限稀释法使包涵体可溶,并最终通过镍离子亲和层析法进一步纯化带His标签的鸡IL-17A.实验表明:采用6M盐酸胍和50mM DTT溶解IL-17A蛋白,调变性蛋白浓度10mg/mL,在蛋白复性液(含250mML精氨酸,10mM还原型与1mM氧化型谷胱甘肽)中,可最终获得大量可溶蛋白.
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