【摘 要】
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本研究主要目的是研究柔嫩艾美尔球虫组织蛋白酶L的基因和蛋白结构,揭示其原核表达规律.选用未孢子化的柔嫩艾美尔球虫houghton株,通过与弓形虫的cathepsinL进行BLASTP找到其
【机 构】
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中国农业大学动物医学院,国家动物原虫实验室,北京,100193
【出 处】
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中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第七次代表大会暨第十二次学术研讨会
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本研究主要目的是研究柔嫩艾美尔球虫组织蛋白酶L的基因和蛋白结构,揭示其原核表达规律.选用未孢子化的柔嫩艾美尔球虫houghton株,通过与弓形虫的cathepsinL进行BLASTP找到其保守结构域,利用RT-PCR和RACE技术,分别获得其保守结构域和cDNA的5’和3’端序列,并将其重组于pET28-a(+),经酶切和测序鉴定后,将重组质粒转入大肠杆菌Transetta(DE3)进行诱导表达.结果表明:扩增获得的柔嫩艾美尔球虫cathepsinL基因的eDNA全长2153bp,包括1413bp的开放阅读框,其编码的氨基酸羧基端含有典型的cathepsinL的结构特征；SDS-PAGE电泳结果显示,在1mMIPTG37℃诱导6h的情况下,表达载体主要以包涵体形式表达,4℃过夜诱导可以使之转为可溶性表达.通过明胶酶谱法初步证明以上清形式表达的重组表达蛋白具有酶的活性.本研究成功克隆和表达了柔嫩艾美尔球虫的eathepsinL基因,为进一步研究其生化和在虫体入侵中的生物学作用奠定基础.
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