APP/PS1双基因转染细胞结构和A水平的变化及还脑益聪方提取物的干预作用

来源 :中华中医药学会第十二次中医药防治老年病学术研讨会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:guxingyiren
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  目的:阿尔茨海默病(Alzheimers Disease,AD)患者的β-淀粉样蛋白(β-amyloid,Aβ)水平在脑内异常代谢、沉积是AD发病的核心环节,而突触丢失、神经元脱失和线粒体变化是AD患者重要的组织形态学改变之一,其丢失程度与老年性痴呆的严重程度密切,探讨中药复方还脑益聪方含药血清对APP/PS1双基因转染细胞超微结构及细胞β淀粉样蛋白40 (β-amyloid protein40,A β 40)、β淀粉样蛋白42(β-amyloid protein42,A β 42)和淀粉样前体蛋白(amyloid precursor protein,APP)水平的影响.方法:高效液相色谱法测定,还脑益聪方(何首乌、人参、黄连等组成)提取物含有大黄素、二苯乙烯苷、人参皂苷Re、Rbl、Rgl、阿魏酸和小檗碱等7种主要成分.建立SD大鼠含药血清干预APP/PS1双基因转染细胞的培养体系,实验分为①正常培养细胞;②7.5%含药血清孵育细胞株;③15%含药血清孵育细胞株;④DAPT组,0.15nmDAPT孵育细胞株;⑤直接给药组,0.31mg/ml还脑益聪方提取物孵育细胞株.用Cell Counting-8法检测中药含药血清对APP/PSI双基因转染细胞的生长活力影响,观察APP/PS1双基因转染细胞的超微结构;用ELISA方法检测含药血清对APP/PS1双基因转染细胞培养上清液中A β 40、A β 42和APP含量的影响.结果:透射电镜显示APP/PS1双基因转染细胞的核膜界限模糊,细胞内线粒体嵴溶解断裂、数量减少,胞质内脂褐素增加,中药复方还脑益聪方含药血清对细胞形态有一定的修复作用.ELISA检测结果表明,APP/PS1双基因转染细胞中分泌的APP、Aβ 40、Aβ42蛋白较HEK293细胞显著增加.中药复方还脑益聪方含药血清对APP/PS1双基因转染细胞分泌的APP、Aβ4o、Aβ42蛋白有显著地抑制作用(P<0.05,P<0.01),7.5%含药血清效果最好.结论:文献研究发现AD并不是由单一信号通路所介导,调控疾病网络某一节点的单靶点药物不能满足治疗AD的复杂疾病,针对诱发疾病的多个靶点、多个节点蛋白同时干预,从而调控整个疾病机制网络的多靶点药物有望成为治疗AD更优的策略.中药复方还脑益聪方对APP/PS1双基因转染细胞株的APP、Aβ40、Aβ 42有显著地抑制作用,进而阻止细胞形态的变化和损伤,是中药复方对APP/PS1损伤细胞的作用机制之一.
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