【摘 要】
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本试验利用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)分别扩增出新城疫病毒(NDV)青海株(QH3)、黑龙江株(HLJ)和甘肃株(A4)的融合蛋白基因的全长核苷酸,再克隆到pMD18-T载体中。经酶切和质粒PCR鉴定,获得阳性重组质粒后,进行序列测定并推导出其氨基酸序列,同时进行了分析和比较。序列分析结果表明,所获得的3株分离株F基因完整的开放阅读框长度为1662bp,共编码F蛋白的553个氨基酸;3个
【机 构】
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新疆天康畜牧生物技术股份有限公司,乌鲁木齐 830011 哈尔滨兽医研究所,哈尔滨维科生物技术开发
【出 处】
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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十三次学术研讨会
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本试验利用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)分别扩增出新城疫病毒(NDV)青海株(QH3)、黑龙江株(HLJ)和甘肃株(A4)的融合蛋白基因的全长核苷酸,再克隆到pMD18-T载体中。经酶切和质粒PCR鉴定,获得阳性重组质粒后,进行序列测定并推导出其氨基酸序列,同时进行了分析和比较。序列分析结果表明,所获得的3株分离株F基因完整的开放阅读框长度为1662bp,共编码F蛋白的553个氨基酸;3个毒株之间的核苷酸序列同源性为88.0%~90.6%;与常用疫苗株之间核苷酸序列同源性只有85.3%~91.6%。三者F基因的裂解位点均为112R-R-Q-K/R-R-F117,符合强毒株裂解区氨基酸组成的特征。以1~374bp的核苷酸序列绘制系统发育树分析表明:QH3株NDV为基因Ⅷ型;A4株NDV为基因Ⅵ型;HLI株NDV为基因Ⅸ型。
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目的:扩增牛结核杆菌mpb-83并在大肠杆菌中表达,为今后临床诊断奠定基础。方法:用PCR方法扩增牛结核杆菌mpb83基因,将其连接到T3克隆载体,然后把它们克隆到原核表达载体PET-32a中,构建重组质粒PET-mpb-83。以重组质粒转化到大肠杆菌BL-21进行表达,用Nl柱纯化,最后纯化产物在SDS-PAGE中检测。结果:牛结核杆菌的MPB83在大肠杆菌中获得高效表达。结论:正确表达的蛋白浓
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