牙鲆胚胎超低温冷冻保存研究

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报道了牙鲆胚胎玻璃化冷冻和程序降温冷冻保存的研究结果。通过比较不同抗冻剂的毒性效应和玻璃化性能,筛选出适宜牙鲆胚胎的玻璃化液配方;确定了适宜玻璃化处理的胚胎发育时期,研制出特定的洗脱溶液,采用分步平衡、快速降温和解冻的技术路线,建立了牙鲆胚胎玻璃化冷冻保存技术。在对牙鲆胚胎进行的8次成功的玻璃化冷冻实验中,共获得冷冻复活胚20粒,最高复活率达32%。其中5次实验中获得冷冻复活胚胎发育孵化出鱼苗的结果。在20枚冷冻复活胚胎中,有14枚冻胚孵化出鱼苗,孵化率高达70%。冻胚孵出的鱼苗,胚体透明,形态正常,无畸形。采用两步冷冻法,将牙鲆尾芽期胚胎放在液氮中保存20min后解冻,在5个实验中有3个实验产生了复活的胚胎,复活率达7.69%~11.8%,在复活的4枚胚胎中,有3枚胚胎继续发育并孵化出鱼苗。采用程序控制降温仪,将牙鲆尾芽期胚抬用0.5℃/min的速率降温至液氮,在液氮中保存24h后解冻,在保存的13枚胚胎中有1枚复活,并孵化出鱼苗。
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