猪繁殖与呼吸综合征病毒JX0612株全长感染性克隆的构建

• 作 者: 吕健[1]孙志[2]张建武[2]刘维全[3]袁世山[2]
• 机 构: 中国农业科学院上海兽医研究所 动物传染病防治研究室农业部动物寄生虫病重点实验室 上海 200232 中国农业大学生物学院 北京 100097
• 出 处: 2007年中国畜牧兽医学会生物制品学分会中国微生物学会兽医微生物学专业委员会学术研讨会
• 发表日期: 2007年期

近年来在全国范围广泛流行的“猪无名高热”的主要病原之一为猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)。本研究根据PRRSV基因组序列设计特异性引物，分五段扩增了高致病性猪蓝耳病病毒JX0612株的全长cDNA，将各cDNA片段克隆到pBlueScript Ⅱ SK(+)载体中，并且利用重叠区单酶切位点将其连接成JX0612株的全长cDNA克隆。运用5’RACE扩增到基因组5’最末端序列，亚克隆到pBlueScript Ⅱ SK(+)的同时在5’端上游引入17启动子序列。在3’端ORF5下游引入Mlu Ⅰ位点，最终成功构建含有PRRSV JX0612株基因组全长cDNA的重组质粒pJX0612和含有遗传标记Mlu Ⅰ的基因组全长cDNA克隆pJX0612-M。两者经体外合成RNA后转染MARC-145细胞，均获得拯救病毒。病毒传代后核酸序列分析表明Mlu Ⅰ遗传标志稳定存在。此外，比较野毒与拯救病毒的病毒滴度变化，同时绘制一步生长曲线，结果发现病毒生长特性没有显著差异；动物回归实验验证了该株病毒就是引起“猪无名高热”的主要病原。本研究中构建的基因组全长感染性cDNA克隆为探寻病毒基因组结构和功能、高致病性蓝耳病发病机理、以及进一步研制针对后者的基因工程疫苗奠定了基础。