【摘 要】
：
目的：通过观察急慢性肝损伤模型中肝组织自噬的表达,了解自噬在肝纤维化及HSC活化过程中的作用.以TGF-β 1为对象,体外进一步研究以明确HSC自噬与活化之间的关系.筛选有效的中药成分,通过调节HSC自噬,抑制HSC活化.方法：1.动物实验：采用CCl4腹腔注射诱导小鼠急慢性肝损伤模型,电镜、Western blot、和免疫荧光的方法检测肝组织中自噬的表达变化.小鼠急性肝损伤造模后,分离原代mHS
【机 构】
：
上海中医药大学附属曙光医院;上海中医药大学肝病研究所 上海中医药大学附属曙光医院;上海中医药大学肝
【出 处】
：
第二十三次全国中西医结合肝病学术会议
论文部分内容阅读
目的：通过观察急慢性肝损伤模型中肝组织自噬的表达,了解自噬在肝纤维化及HSC活化过程中的作用.以TGF-β 1为对象,体外进一步研究以明确HSC自噬与活化之间的关系.筛选有效的中药成分,通过调节HSC自噬,抑制HSC活化.方法：1.动物实验：采用CCl4腹腔注射诱导小鼠急慢性肝损伤模型,电镜、Western blot、和免疫荧光的方法检测肝组织中自噬的表达变化.小鼠急性肝损伤造模后,分离原代mHSC,检测LC3B蛋白表达.分离培养正常mHSC,MDC染色观察不同培养时间自噬的表达变化.2.体外实验：采用TGF-β1、丹参酚酸B分别干预小鼠HSC株JS-1,研究其对自噬的作用.自噬抑制剂3-MA、CQ及siAtg7干扰抑制自噬.BODIPY染色观察mHSC脂滴变化,MTT检测JS-1增殖,MDC染色和LC3-GFP转染观察自噬小体表达,Western blot和RT-PCR检测HSC活化指标(α-SMA、Col.Ⅰ)、自噬指标(Beclin1、LC3B、Atg5、Atg7)的表达.结果：1.急慢性肝损伤动物肝脏自噬的观察：CCl4诱导的急性肝损伤模型自噬指标LC3BⅡ、p62蛋白表达均增加(P＜0.01)；分离CCl4诱导的急性肝损伤小鼠HSC,LC3BⅡ蛋白表达明显增加；正常原代小鼠HSC分离后随培养天数的增加,MDC染色胞浆内蓝色荧光小点表达明显增加.CCl4诱导的肝纤维化模型α-SMA、Col.Ⅰ蛋白及mRNA的表达明显增加,自噬指标LC3BⅡ、Atg7蛋白表达明显增加(P＜0.05,P＜0.01).急慢性模型肝组织电镜下均可观察到肝细胞内自噬小体,激光共聚焦显微镜下可观察到LC3B的表达明显增加,且与α-SMA标记的HSC具有明显的共定位现象.说明CCl4诱导急慢性肝损伤时小鼠肝脏自噬水平上调,以及HSC活化伴有自噬水平增加.2.TGF-β 1通过诱导自噬激活肝星状细胞：TGF-β 1刺激JS-1活化,伴自噬水平上调,如LC3B Ⅱ蛋白(P＜0.05)和Atg5、Beclin1mRNA的表达增加(P＜0.01),而抑制自噬能够阻断TGF-β 1诱导的JS-1活化.3-MA能够抑制TGF-β 1诱导的JS-1增殖(P＜0.01)、α-SMA mRNA的表达(P＜0.01)、Col.Ⅰ蛋白的表达(P＜0.01)及细胞内LC3-GFP荧光小点的表达；CQ能够抑制TGF-β 1诱导的JS-1增殖(P＜0.01)、抑制α-SMA、Col.Ⅰ mRNA(P＜0.01)和蛋白(P＜0.01、P＜0.05)的表达；siAtg7干扰后能明显抑制TGF-β 1诱导的Col.Ⅰ蛋白表达(P＜0.01).3.丹参酚酸B盐抑制JS-1自噬及活化：浓度为1 0-5M时能明显地抑制JS-1增殖(P＜0.01),同时能够明显抑制自噬,如能抑制TGF-β1诱导的LC3-GFP荧光小点的表达,及LC3BⅡ蛋白表达(P＜0.01),加入自噬抑制剂3-MA、CQ和siAtg7干扰后,其抑制JS-1自噬和活化作用更加明显,表现为LC3BⅡ和Col.Ⅰ蛋白的表达进一步降低(P＜0.01).结论：1.CCl4诱导的小鼠急慢性肝损伤模型中,肝组织自噬水平上调,同时观察到HSC活化伴有自噬的增加.2.TGF-β1可以通过诱导自噬从而激活HSC.3.SA-B能够通过抑制自噬抑制TGF-β1激活HSC.
其他文献
Aim: We sought to determine the relationship between cancer-related fatigue,chemotherapy-associated adverse effects in patients with advanced stages of cancer,and the levels ofTNF-a, IL-1 and 17-hydro
Purpose: To investigate the mechanism of pretreatment with EGFR inhibitors sensitizes cancer cells to DNA-damaging therapy.Implementation &Methodology: MTT assay was applyed to detect inhibition of ce
Objective: To observe the changes of mitochondrial membrane potential (MMP),cytochrome c (Cyto-c), Caspase-3, 9 activity, cleavage of PARP and phosphorylation level of AKT and ERK, investigate the mec
Purpose: Numb is evolutionary conserved from Drosophila to human, and considered as the cell fate determination protein by being asymmetrically segregated during cell division.Mammalian Numb (mNumb) d
目的：观察HBeAg阳性的乙肝病毒携带者中医证候分型,为临床对本病的防治提供依据.方法：将194例HBeAg阳性的乙肝病毒携带者,根据慢性乙肝病毒携带者证候规律研究的病例报告表(CRF)进行问卷调查,将HBeAg阳性乙肝病毒携带者的问卷调查中症状专家辨证结果进行分析研究.结果：194例HBeAg阳性的乙肝病毒携带者涉及的中医证型有9种,9种证型及出现频数所占百分比分别为：肾虚(35.1％)、脾虚(
目的：观察微生态制剂联合肠内营养治疗对肝性脑病患者血清内毒素、肿瘤坏死因子α、白细胞介素18(interleukin-18,IL-18)、血氨水平及全身营养状态的影响.方法：选取60例肝性脑病患者,随机分为三组,在常规保肝利尿等基础上,三组分别予口服培菲康加肠内营养,单纯口服培菲康,单纯静脉营养,疗程均为2周.分别检测治疗前和治疗后第7天、第14天血清内毒素、TNF-α、IL-18、血氨及白蛋白的
背景与目的：Notch信号通路在胆管发生及慢性胆道疾病中发挥关键作用.前期研究表明黄芪汤对大鼠胆汁淤积性肝纤维化具有良好的干预效应,能有效抑制胆管新生,但其作用机制尚不明确.本研究的目的在于探讨黄芪汤对胆汁性肝纤维化Notch信号通路的干预效应.方法：①采用改良的胆总管结扎方法(bile duct ligation,BDL)制备大鼠胆汁淤积性肝纤维化模型,观察造模1周、2周、3周、4周时模型大鼠肝