【摘 要】
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背景与目的：Notch信号通路在胆管发生及慢性胆道疾病中发挥关键作用.前期研究表明黄芪汤对大鼠胆汁淤积性肝纤维化具有良好的干预效应,能有效抑制胆管新生,但其作用机制尚不明确.本研究的目的在于探讨黄芪汤对胆汁性肝纤维化Notch信号通路的干预效应.方法：①采用改良的胆总管结扎方法(bile duct ligation,BDL)制备大鼠胆汁淤积性肝纤维化模型,观察造模1周、2周、3周、4周时模型大鼠肝
【机 构】
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上海中医药大学附属曙光医院,上海市中医药研究院肝病研究所,肝肾疾病病证教育部重点实验室,上海市中医临床重点实验室,国家中医药管理局慢性肝病虚损重点实验室 201203
【出 处】
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第二十三次全国中西医结合肝病学术会议
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背景与目的：Notch信号通路在胆管发生及慢性胆道疾病中发挥关键作用.前期研究表明黄芪汤对大鼠胆汁淤积性肝纤维化具有良好的干预效应,能有效抑制胆管新生,但其作用机制尚不明确.本研究的目的在于探讨黄芪汤对胆汁性肝纤维化Notch信号通路的干预效应.方法：①采用改良的胆总管结扎方法(bile duct ligation,BDL)制备大鼠胆汁淤积性肝纤维化模型,观察造模1周、2周、3周、4周时模型大鼠肝功能、肝组织羟脯氨酸(hydroxyproline,Hyp)含量以及肝组织病理学(HE和天狼猩红染色)的动态变化.②免疫组化、免疫荧光共染、免疫印迹以及RT-PCR等方法观察巨噬细胞标记物(CD68、CD163)、纤维化(α-SMA、Desmin、TNF-α、TGF-β、Col-Ⅰ、Col-Ⅳ、MCP-1)、胆管上皮细胞标记物(CK19)的动态变化.③观察Notch信号通路受体Notch1,Notch2,Notch3,Notch4,配体Jagged1,Jagged2和Delta1,Delta3,Delta4以及下游靶基因Hesl,上游负调控因子Numb以及转录调控因子RBPJκ mRNA表达的动态变化.⑤观察黄芪汤对胆汁性肝纤维化Notch信号的干预作用.大鼠胆总管结扎后,于造模1周末予以黄芪汤干预,以索拉菲尼为阳性对照药物,共计3周.观察不同干预措施对于血清肝功能、肝组织Hyp含量、肝组织病理学、胆管上皮细胞增殖及Notch信号通路的干预作用.结果：①随着胆管结扎时间的延长,肝内新生胆管逐渐增加,4周时肝内广泛新生的胆管呈花环样结构,新生胆管周围伴有大量的胶原沉积.肝组织Hyp含量进行性增加(P＜0.01,vs sham).②肝星状细胞与肌成纤维细胞活化标记物desmin和α-SMA表达逐渐增加,尤以α-SMA升高最为显著.且肝纤维化相关因子CD68、CD163、TNF-α、TGF-β 1、Col-Ⅰ、Col-Ⅳ、MCP-1 mR NA表达均从1周开始显著升高(P＜0.01,vs sham),3周时达到高峰,4周时有所下降,但仍然显著高于sham组(P＜0.01).③免疫组化显示胆管上皮细胞特异性标记物CK19随模型进展而表达逐渐增加.④RT-PCR检测结果表明,随着模型的进展,Notch受体Notch2、Notch3、Notch4 mRNA均随着模型进展而表达逐渐增加,其中Notch2从2周开始显著高于sham组(P＜0.05),Notch3在1周时即显著高于sham组(P＜0.01),Notch4在3周时显著升高.
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