【摘 要】
：
目的 研究人肝刺激因子(hHSS)对肝细胞的促增殖和抗凋亡作用的机制,探索线粒体上可能与hHSS有相互作用的蛋白质,阐明其发挥作用的机制.方法 用Flag-HSS-pcDNA3.0转染肝肿
【机 构】
：
首都医科大学细胞生物学系,北京 100069
【出 处】
：
中华医学会医学细胞生物学分会第三届全国学术会议
论文部分内容阅读
目的 研究人肝刺激因子(hHSS)对肝细胞的促增殖和抗凋亡作用的机制,探索线粒体上可能与hHSS有相互作用的蛋白质,阐明其发挥作用的机制.方法 用Flag-HSS-pcDNA3.0转染肝肿瘤细胞系BEL7402细胞,经G418筛选确立稳定表达融合蛋白Flag-HSS的细胞株,用转染空载体pcDNA3.0的BEL-7402细胞作为阴性对照.采用免疫共沉淀(co-IP)的方法,探索与HSS可能有相互作用的蛋白质,用基质辅助激光解吸离子化飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)的方法,鉴定SDS-PAGE胶条内的蛋白质并分析.重复co-IP实验,之后用Western blot验证HSS与相应结合蛋白的存在.结果 用Anti-Flag Agarose从过表达HSS的细胞裂解液中沉淀Flag-HSS.除沉淀出Flag-HSS外,还有其它与HSS有结合的蛋白质随着HSS共同被沉淀出来,洗脱蛋白行SDS-PAGE电泳,然后用银染方法显色胶中蛋白质.将转染HSS细胞制备胞质蛋白(实验组)和转染空载体的胞质蛋白(阴性对照)同时进行SDS-PAGE电泳分离,将实验组差异条带切胶取出,用MALDI-TOF-MS的方法进行分析,鉴定得出HSS可能与线粒体上的内膜孔蛋白—腺苷酸转位酶(ANT)有相互作用.用免疫共沉淀结合Western blot检测证明,HSS与ANT的同时存在.在稳定表达融合蛋白Flag-HSS的细胞株内过表达ANT,co-IP沉淀ANT,用Western blot验证HSS的存在,从而反面证明HSS与ANT的结合.总之,HSS与肝细胞线粒体上的ANT有蛋白质-蛋白质相互作用.结论 肝刺激因子可以抑制肝细胞的凋亡,其机制可能与线粒体膜通透复合体上ANT有关,HSS通过与此蛋白相互作用从而发挥其抗凋亡的作用.
其他文献
两轮摩托车是安全系数较小的交通工具和运动器械。几年来在运动场上和交通道路上发生了不少的死亡事故,虽然原因是多方面的,但其中有相当部分是由于不戴头盔、不正确佩戴头
随着科技的不断发展,互联网+的教育形式在日常的教学活动中逐渐被普及.这种新兴的教育形式能够打破传统教学模式的枯燥乏味,有效的增加师生之间的互动,进而营造出积极、良好
通过血管内皮细胞的活化、迁移、黏附和管样结构形成等途径,研究从苦参中提取的一种新的黄酮类化合物(2S)-8-异戊烯基-7,2,4-三羟基5-甲氧基二氢黄酮(SF-45)对血管生成的
一、住房抵押贷款体系 住房抵押贷款体系是指一国或一地区依据该国经济制度、经济发展状况等国情形成和建立旨在解决本国或本地区居民住房消费矛盾的不同种类、方式、期限、
个性化阅读教学是有效迎合新课程改革的一种教学模式,能够全面围绕学生个性开展教学,促进学生个性、语文素养的健康发展.对教师来说,需要充分结合高中语文阅读教学目标,充分
Objective △Np63,the main isomer of p63,has been found to be overexpressed in head and neck squamous cell carcinoma(HNSCC) and other squamous epithelium-der
一 个企业主或一个企业的管理层 ,有了创意却没有充足的内部资本加以实现 ,于是就必须面向外部寻求资本来源。为了降低外部融资的成本 ,或取得资金 ,企业要么必须确认投资者
本文讨论彩色数字摄象机数字化视频通道各单元功能电路的设计原理,包括数字式箝位、增益控制、黑斑补偿、伽玛校正、轮廓增强、混消隐、黑白切割和矩阵电路等,上述设计对其它
本文将沃尔什函数与方块脉冲函数的构造方法相结合,导出了一种介于沃尔什函数和方块脉冲函数之间的三值函数——桥函数,可以证明,在一定条件下桥函数具有正交性,根据其正交条