【摘 要】
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目的：探讨肝癌细胞经HNF4a慢病毒转染后的细胞生物学变化. 方法：经过gateway技术构建HNF4a-IRES-hrGFP以及CMV-luciferase2-maket2慢病毒表达载体；293FT细胞包装慢病毒并超速离心浓缩慢病毒；HNF4a-IRES-hrGFP、CMV-luciferase2-maket2慢病毒颗粒分别共感染肝癌细胞系HepG2、BEL-7402.流式分选hrGFP、mak
【出 处】
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中华放射学学术大会2016、中华医学会第23次全国放射学学术大会暨中华医学会第24次全国影像技术学术大会
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目的：探讨肝癌细胞经HNF4a慢病毒转染后的细胞生物学变化. 方法：经过gateway技术构建HNF4a-IRES-hrGFP以及CMV-luciferase2-maket2慢病毒表达载体；293FT细胞包装慢病毒并超速离心浓缩慢病毒；HNF4a-IRES-hrGFP、CMV-luciferase2-maket2慢病毒颗粒分别共感染肝癌细胞系HepG2、BEL-7402.流式分选hrGFP、maket2双标记细胞.Western检测HNF4a转染肝癌细胞后的表达情况.Transwell实验检测HNF4a对肝癌细胞迁移侵袭的影响.添加D-luciferin底物检测双标记肝癌细胞中荧光素酶的表达活性.双标记肝癌细胞种植于裸鼠皮下并活体示踪种植肝癌细胞. 结果：成功构建了HNF4a-IRES-hrGFP慢病毒载体；成功建立了HNF4a-IRES-hrGFP、CMV-luciferase2-maket2双标记肝癌细胞系HepG2、BEL-7402.流式分选结果显示HNF4a-IRES-hrGFP、CMV-luciferase2-maket2双标记肝癌细胞系HepG2、BEL-7402阳性表达率分别为 83％、88％并成功双选出双标记细胞.Western结果显示HNF4a成功在双病毒转染细胞中表达.Transwell结果显示HNF4a表达抑制了肝癌细胞的肿瘤侵袭性.体外荧光素酶检测显示双标记细胞中光子数与细胞数成线性正比关系.HNF4a 转染HepG2后种植裸鼠4周后，未发现肿瘤生长.活体示踪结果显示HNF4a转染后显著抑制了BEL-7402肿瘤生长. 结论：首次HNF4a慢病毒转染肝癌细胞系，有助于长期研究HNF4a在肝癌细胞中的生物学作用；活体示踪表明HNF4a抑制肝癌细胞生长，为HNF4a病毒生物治疗提供了理论支持.
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