【摘 要】
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RNA干涉(RNA interference,RNAi)是双链RNA(double-strand RNA,dsRNA)介导的、序列特异的转录后基因沉默(post-transcriptional gene silencing,PTGS)现象,广泛存在于线虫、果蝇、植物、真菌及哺乳动物等多种生物体中,具有高效性和特异性.目前,RNAi已发展成为一种高效的实验技术,广泛用于新基因筛选、基因功能鉴定以及基
【机 构】
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第四军医大学第一附属医院检验科 第四军医大学生物化学与分子生物学教研室
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RNA干涉(RNA interference,RNAi)是双链RNA(double-strand RNA,dsRNA)介导的、序列特异的转录后基因沉默(post-transcriptional gene silencing,PTGS)现象,广泛存在于线虫、果蝇、植物、真菌及哺乳动物等多种生物体中,具有高效性和特异性.目前,RNAi已发展成为一种高效的实验技术,广泛用于新基因筛选、基因功能鉴定以及基因治疗等方面,显示了广阔的应用前景.由乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)持续感染所引起的病毒性肝炎、肝硬化和肝癌等已成为严重危害我国人民生命健康的疾病.现有的干扰素及核苷类似物药物等抗病毒治疗手段存在着疗效不够满意、治疗后复发率高、药物毒副作用较大等不足.为探索RNAi对HBV基因表达和复制的抑制作用,我们选择HBVX蛋白基因为靶序列,构建了表达小干涉RNA (short interferingRNA,siRNA)的载体,通过与pTK-Hyg质粒共转染稳定表达HBV的HepG2 2.2.15细胞,潮霉素抗性筛选获得稳定细胞克隆,检测siRNA对细胞培养上清中的HBsAg和HBeAg,HBV DNA以及HBV mRNA的抑制作用。
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目前基因芯片技术广泛应用于临床仍存在着一些困难,其中一个共性的问题就是样品制备方面的不足:即通常为提高检测灵敏度和特异性,需针对各检测对象分别设计引物,甚至建立不同的扩增体系、扩增方法和扩增条件,来进行多重的PCR扩增.这显然大大增加了工作量和工作难度,从而在一定的程度上限制了芯片技术的高通量、高速度的发挥,严重制约了病原微生物的芯片检测在临床及其他环境的广泛应用.本研究针对多重PCR法芯片检测样
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