【摘 要】
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本研究旨在对梅花鹿-牛异种体细胞核移植(Interspecies Somatic Cell Nuclear Transfer,ISCNT)的显微操作方法进行系统研究,从而优化其操作过程.以梅花鹿耳皮肤成纤维细
【机 构】
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中国农业科学院特产研究所,长春 130112
【出 处】
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第七届(2016)中国鹿业发展大会
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本研究旨在对梅花鹿-牛异种体细胞核移植(Interspecies Somatic Cell Nuclear Transfer,ISCNT)的显微操作方法进行系统研究,从而优化其操作过程.以梅花鹿耳皮肤成纤维细胞为供核细胞,牛MⅡ期卵母细胞为受体,分别采用盲吸法、挤压法和脱羰秋水仙碱(Demecoline,DEME)化学辅助的方法去核,带下注射(Perivitelline Microinjection,PM)、Pizeo破膜细胞胞质内注射(Break-Membrane-Cell Intracytoplasmic Microinjection,BMCIM)和全细胞胞质内注射(Whole-Cell Intracytoplasmic Microinjection,WCIM)的方法注核,带下注核的卵母细胞电融合后化学激活,其余方法注核后直接化学激活,重组胚用CR1aa培养液体外培养.结果表明：(1)DEME辅助法去核率最高,挤压法最低,三种去核方法的去核率差异显著(P＜0.05),去核时间差异不显著(P>0.05)；(2)PM组和WCIM组注核成功率分别为100％和94.8％,注核时间分别为31.0s和35.1s,显著低于BMCIM法(P＜0.05),但是注核成功率显著高于BMCIM法(P<0.05),而且两者差异不显著(P>0.05)；(3)BMCIM组和WCIM组的激活率均显著高于PM组(P<0.05),其中一步法的BMCIM组最高,一步法和两步法在激活率、卵裂率和囊胚率方面均无显著差异(P＞0.05).结果提示：DEME辅助去核、Pizeo辅助破膜胞质内注射的一步法显微操作可有效用于梅花鹿-牛的异种体细胞核移植的研究.
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