【摘 要】
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江西省是我国草鱼养殖主产区之一,每年5月份至10月份一龄及二龄草鱼种因暴发出血病而给渔民带来了巨大损失.为了最终实现对该病进行防控的目的,对病原的鉴定及检测方法的建立是最基础也是最重要的环节.本人手2009年9月下旬在江西省南昌市收集一龄、二龄具典型出血症状的草鱼种样品,取肌肉、内脏研磨,组织液经离心、过滤除菌后进行攻毒实验和细胞感染实验.结果发现实验鱼大量死亡且出现典型出血症状,取病变组织电镜观
【机 构】
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中国水产科学研究院珠江水产研究所;上海海洋大学 中国水产科学研究院珠江水产研究所
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江西省是我国草鱼养殖主产区之一,每年5月份至10月份一龄及二龄草鱼种因暴发出血病而给渔民带来了巨大损失.为了最终实现对该病进行防控的目的,对病原的鉴定及检测方法的建立是最基础也是最重要的环节.本人手2009年9月下旬在江西省南昌市收集一龄、二龄具典型出血症状的草鱼种样品,取肌肉、内脏研磨,组织液经离心、过滤除菌后进行攻毒实验和细胞感染实验.结果发现实验鱼大量死亡且出现典型出血症状,取病变组织电镜观察,在脾样品中发现病毒颗粒；CIK细胞盲传六代未出现明显细胞病变,但感染细胞固定后经电镜观察发现,细胞质内有大量病毒聚集,病毒无囊膜,近球形,直径约70nm,形态与已报道的草鱼呼肠孤病毒(GrassCarp Reovirus,GCRV)相似,暂定名为NC09.将病毒提纯后获得的核酸分别经DNA酶、RNA酶和绿豆核酸酶消化,证实为双链RNA (dsRNA)病毒.十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)结果显示,病毒基因组由11个dsRNA组成,呈现水生呼肠孤病毒基因组典型特征.经大量培养的病毒株GCRV873、HZ08、NC09提取RNA,通过琼脂糖凝胶和聚丙烯酰胺凝胶显示,NC09株病毒是一株新的毒株.采用单引物扩增技术获得了部分序列,根据序列涉及引物,经检验引物特异性较强,从而建立该株病毒的分子学检测方法.
其他文献
实验测定了两种规格(27.0±2.0、12.0±2.0g)野生克氏原螯虾的肌肉生化成分、消化酶和免疫酶活性等.结果表明：大规格虾的肌肉以及除肌肉外其它部分的能量均高于小规格虾,肌肉中天冬氨酸、谷氨酸和精氨酸的含量均高于小规格虾；肝胰脏和肠道内蛋白酶、淀粉酶活力随pH值的增大均呈现先上升后下降的规律变化,两种规格虾肠道中蛋白酶和淀粉酶以及小规格虾肝胰脏中淀粉酶的最适pH均为7.2,而小规格虾肝胰脏中
向短蛸(Octopus ocellatus)血淋巴中加入不同浓度的甲硫氨酸脑啡肽(met-Enkephalin,met-ENK)后,采用生化方法测定了短蛸血清和血细胞中酸性α-醋酸萘酯酶(α-Naphthy Acetate Esterase,ANAE)和甲硫氨酰氨肽酶(methionineaminopeptidases,MetAP)的活力.结果表明：实验组血清ANAE活力均低于对照组,ANAE活力
研究已证实杆状病毒可以进入各种脊椎动物细胞,包括哺乳动物细胞,禽类细胞,以及鱼类细胞。由于杆状病毒能高效转导哺乳动物细胞,在疫苗研究,基因治疗,以及基因功能研究方面都有一定应用,现已成为一种新型的基因导入载体。然而研究发现,杆状病毒转导鱼类细胞系效率低下,这就阻碍了杆状病毒在鱼类细胞中 的应用。本研究构建了重组杆状病毒Bac-CMV-EGFP,以CMV为启动子,EGFP为报告基因。用重组杆状病毒转
2009年9月下旬江西省南昌市一龄、二龄草鱼大面积暴发出血病,在排除细菌和寄生虫感染可能性后,取具有典型症状的病鱼组织进行电镜观察,在脾、肾样品中发现大量病毒颗粒,病毒无囊膜,近球形,直径约70nm,形态与已报道的草鱼呼肠孤病毒(Grass Carp Reovirus,GCRV)相似。取病鱼肌肉、内脏研磨,组织液经离心、过滤除菌后进行攻毒实验和细胞感染实验,结果发现攻毒鱼大量死亡且出现典型出血症状
从近海区生态环境样品分离纯化的98株微生物中,用根癌农杆菌平板筛选模型经过初筛和复筛,筛选出具有细菌群体感应干扰活性的微生物细菌ZD 27,并对其进行形态、生理生化特性和16S rDNA分子鉴定,在此基础上考察其水解酶活特性和热稳定性。结果显示,该菌株具蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)的典型特征,其16S rDNA序列通过比对分析,与GenBank中蜡样芽孢杆菌的16S rDNA的部
一株从锯缘青蟹中分离的呼肠孤病毒(Scylla serrata reovirus,简写为SsRV),基因组为13个节段的双链RNA.通过电子显微镜观察结果表明：完整的病毒粒子直径为70nm,与呼肠孤科其他已知病毒粒子大小一致.由于经过蔗糖密度梯度纯化,病毒粒子失去外层衣壳,直径约为55nm(比其他呼肠孤科的完整病毒粒子略小).病毒粒子形态和基因序列分析证明SsRV属于呼肠孤病毒科.SsRV RNA
呼肠孤病毒(GrassCarp Reovirus,GCRV)是草鱼出血病的病原体,其基因组由11条分段的dsRNA片段组成.其中VP6蛋白由S8基因片段编码,NS38蛋白是由S9片段编码.VP6蛋白在病毒的转录与复制及病毒核衣壳的形成中起重要作用,且有弱的dsRNA结合能力,且其中和效价强.本研究提取了GCRV 096病毒的基因组RNA,通过RT-PCR扩增vp6和NS38两个基因,获得了其全基因
造血组织在甲壳类动物的免疫防御中起着非常重要的作用,而Astakine是一种具有促进造血组织细胞分化和增殖的细胞因子.研究证实WSSV选择BP53 (ATP合酶β亚基)作为侵染宿主的靶点,在淡水螯虾中发现BP53作为Astakine的受体参与了细胞分化.因此WSSV、BP53、Astakine之间存在着一定的联系.本实验主要针对WSSV、BP53、astakine三者之间进行研究.应用反转录聚合酶
根据迟缓爱德华氏菌165 rRNA保守区域基因序列,设计引物和TaqMan荧光探针,通过对反应条件进行优化,建立了用于检测迟缓爱德华氏菌的荧光定量聚合酶链式反应(Fluorescent quantitative polymerase chain reaction,FQ-PCR)诊断方法.通过所构建的16S rRNA质粒标准品核酸拷贝数(C/5,x)的对数值与其对应Ct值(y)的相关性,分析得到FQ
新鲜度是鱼类或鱼类制品质量的一个重要指标，对产品最终质量十分重要.鱼类新鲜度的传统检测方法主要有菌落总数、挥发性盐基态氮(TVB-N)、硫代巴比妥酸(TBA)、鲜度指标(K值)等，但这些检测方法测定耗时长、操作较复杂需要高技术的操作人员，不能满足快速检测的要求.为了满足快速检测淡水鱼新鲜度的要求，本文提出一种快速检测淡水鱼新鲜度的方法—一电导法，实验以草鱼为样品，研究-3℃、3℃贮藏过程中鱼肉浸出